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例1 患者,男,24歲。因劇烈咳嗽伴發熱2日,前來我院就診。患者2日前因夜感風寒后出現咳嗽,咳白色黏痰,伴頭痛,鼻塞,流清涕,曾自服急支糖漿無好轉。否認既往藥物過敏史。體格檢查:體溫39℃,脈搏94次/min,呼吸20次/min,血壓100/65mmHg。咽部充血,雙肺呼吸音粗,可聞及大量干音,尤以右肺為甚。余無特殊異常。x線胸片示雙肺紋理增多。初步診斷:急性支氣管炎。佐以維生素k120mg加5%葡萄糖注射液250ml稀釋后靜滴,1次/d。靜滴僅1分鐘,病人出現面部潮紅,胸悶異常,心悸,呼吸困難,出汗。急查血壓為80/40mmHg,心率120次/min。考慮為維生素K1過敏性休克反應。立即停藥,并給予吸氧。靜注0.1%腎上腺素1mg,地塞米松10mg。15分鐘后癥狀緩解,各項生命體征平穩。
例2 患者,女,43歲。因左腰劇痛連腹,半小時前來我院就診。1年前在某醫院查x線腹部平片,示左側輸尿管中段結石。主訴腰痛劇烈難忍,伴尿痛,口干苦。體格檢查:體溫38℃,脈搏80次/min,呼吸20次/min,血壓114/70mmHg,左腎區叩擊痛。急查血常規示:WBC 10.9×109/L,尿常規檢查紅細胞滿視野。初步診斷:左側輸尿管結石并絞痛。佐以維生素K120mg加5%葡萄糖注射液250ml稀釋后靜滴,1次/d。用藥2分鐘,病人出現面色蒼白,胸悶異常,呼吸困難,查血壓100/70mmHg,心率84次/min。考慮為維生素K1過敏反應,立即停藥,讓患者平臥,并給予吸氧,同時密切觀察各項生命體征。2分鐘后患者癥狀得以自行緩解。
討論
維生素K1是參與肝內凝血酶原凝血因子合成的藥物,因其還有解除氣管、腸道平滑肌痙攣的作用,且效果顯著,因此臨床上還廣泛應用于呼吸道、胃腸道及泌尿系等疾病的治療。維生素K1如果靜滴過快,可出現面部潮紅、出汗及胸悶等過敏反應癥狀,一旦處理不及時,可引起血壓急劇下降甚至死亡。
患兒,女,17 h,剖宮產出生體重3.2 kg,母親身體健康,20 min前突然反復嘔吐,開始吐出少量粘液,后吐出鮮血,總量約為70~80 ml,患兒生后無尿,大便3次,哭聲弱,反應差,由本院產科轉入。查體:T.37℃,P.130次/min,R.45次/min,足月兒貌,全身皮膚無出血點,前囟平軟,面色蒼白,頸軟,無抵抗,雙肺呼吸音稍粗,未聞及干濕音,心率130次/min,律齊,心音稍鈍,臍帶殘端無滲血,腹軟,肝降肋下未觸及,神經系統檢查無異常。入院后即查血常規,紅細胞2.58 ×1012/L,白細胞為9.3 g/L,血小板211×109/L,PT 25.2 s,TT 23.1 s,入院后立即靜脈注射維生素K1,止血敏,蛇毒血凝酶,輸同型血50 ml,輸維持液及對癥處理,同時,置胃管,將胃內血液抽出,用1.4%的碳酸氫鈉液洗胃至洗出液清亮為止,后每隔3 h由胃管內注入1.4%碳酸氫鈉液3 ml,維持胃酸pH>5.0入院24 h止血。入院后排出鮮紅色大便2次,果醬色大便4次累計約80 g,次日復查血常規,紅細胞3.85×1012/L,血紅蛋白12.8 g/L,血小板189×109/L,入院24 h血止,患兒病情平穩,禁食48 h進奶,開始由稀到稠,由少到多,逐漸過渡到正常奶量。患兒住院8 d痊愈出院。
2 討論
新生兒出血癥又稱新生兒自然出血,新生兒黑便,新生兒低凝血酶原血癥等,是由于維生素K的缺乏使其依賴凝血因子合成不足及活性降低所致的一種自限性出血性疾病。但若不及早診斷和治療會導致死亡,特別是早發性重型,正常足月兒常于生后2~3 d發病,出血部位多為消化道,輕者常為大便內帶血,或排出少量果醬樣大便;重者嘔血或排血便,其次為臍部滲血、皮下出血、血尿、陰道出血、穿刺部位滲血等,偶見顱內出血,肺出血,少數嚴重大出血可致貧血和休克。若出現顱內出血,肺出血時,可出現相應的臨床癥狀,本例患兒出生17 h即出現消化道大出血,出血量達70~80 ml,查PT 25.2 s,TT 23.1 s明顯延長,經及時靜注維生素K,止血敏,蛇毒血凝酶,輸血及對癥處理,置胃管抽靜血液,用1.4%碳酸氫鈉液洗胃后,每隔3 h由胃管注入1.4%碳酸氫鈉液3 ml,維持胃酸pH>5.0 病情很快得到控制,住院8 d痊愈出院。因診斷明確,搶救及時,挽救了患兒生命。像這樣早發型消化道大出血病例,在我科臨床工作中屬首例,應注意與以下疾病的鑒別,新生兒咽下綜合征,血小板減少性紫癜,DIC,消化道應激性潰瘍等,并提醒同道重視生后肌注維生素K1的防預措施。
【關鍵詞】 高效液相色譜法;維生素K1;凍干乳;含量測定
[Abstract] Objective:To determine the content of Vitamin K1 in lyophilized emulsion by reversedphase high performance liquid chromatography.Methods:The reconstituted Vitamin K1 emulsion was mixed with isopropyl alcohol. A Hypersil BDS C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used. The mobile phase was methanoldehydrated alcohol (70∶30), the UV detector at wavelength 254 nm and the flow rate 1.0 mL/min. The injection volume was 20 μL and the column temperature 35 ℃.Results:The excipients did not interfere with the determination of Vitamin K1. The method proved to be linear within the range of 25~250 mg/L. The recovery of the assay was 100.99% and RSD was 0.24%. Conclusions:Isopropyl alcohol can play a good role in emulsion breaking, meanwhile have no impact on measurement of Vitamin K1. The method appears to be simple, speedy, accurate and can be used to control the preparation quality.
[Key words] HPLC; Vitamin K1; Lyophilized emulsion; Determination
維生素K1為人體肝內合成凝血酶原的必需物質,可促進凝血酶原(Ⅱ因子)及其它凝血因子(Ⅷ因子、Ⅸ因子和Ⅹ因子)的前體物質羧化后轉變成凝血酶原及相應因子[1]。臨床常用于治療肝硬化引起的消化道出血及新生兒與產婦維生素K1缺乏。但由于維生素K1在水中不溶,其溶液型注射劑含有增溶劑吐溫80,該增溶劑易氧化,其氧化產物易引起過敏,用量較大時具有一定溶血作用 [2,3]。將維生素K1制成凍干乳,臨用前加水重建成亞納米乳可避免現有注射液的安全性、水溶性和穩定性問題。凍干乳劑含乳化劑、凍干保護劑等成分,其含量測定則需要排除這些成分的干擾。本文建立了一種準確、簡便的凍干乳中維生素K1的含量測定方法,現報道如下。
1 儀器與試藥
LC2010 A型高效液相色譜儀,配備UV/Vis檢測器、LCsolution色譜工作站(日本島津);電子天平(Sartorius);KLupII10型超純水機(臺灣艾柯)。維生素K1凍干乳(規格:10 mg,自制);維生素K1對照品(中國藥品生物制品檢定所,100156 200003);甲醇、無水乙醇為色譜純;其它試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱:大連依利特Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇∶無水乙醇(70∶30);柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL/min;檢測波長:254 nm,進樣量:20 μL。
2.2 儲備溶液和對照品溶液的配制
精密稱取維生素K1對照品適量,加異丙醇制成每毫升中含維生素K1 1 000 μg的溶液,搖勻,過濾,取續濾液作為儲備液。將儲備液以異丙醇稀釋10倍作為對照品溶液(100 mg/L)。
2.3 供試品溶液的制備
精密量取維生素K1凍干乳適量(相當于維生素K1 10 mg),加水重建成乳狀液,置于100 mL容量瓶中,加異丙醇破乳并稀釋至刻度,搖勻,過濾,取續濾液作為供試品溶液。
2.4 系統適應性試驗
在上述色譜條件下,取對照品溶液(100 mg/L)及供試品溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖。維生素K1的保留時間為8.7 min,與相鄰成分能完全分離(R>1.5)。以藥物峰計算色譜柱的理論塔板數為7 259。按處方比例及工藝條件制備不含維生素K1的陰性空白凍干乳,按“2.3”項下供試品溶液的制備方法處理樣品,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結果表明,處方中輔料不干擾測定。色譜圖見圖1。
2.5 標準曲線的制備
精密量取儲備液適量,加異丙醇稀釋制成25、50、100、150、200、250 mg/L的系列濃度溶液;分別精密吸取20 μL進樣,記錄峰面積;以藥物濃度為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y),得回歸方程:Y=3.81×104X-2.74×104,r2=0.9998,維生素K1在25~250 mg/L范圍內與峰面積呈良好的線性關系,可采用外標一點法測定藥物含量。
2.6 定量限與檢測限
取對照品溶液逐級稀釋成適當濃度,吸取20 μL進樣,使其主藥峰高為噪音峰高的3倍,對應濃度作為其最低檢出濃度,并計算得出其最低檢出量為25.15 ng。將對照品溶液逐級稀釋成適當濃度,吸取20 μL進樣,使其主藥峰高為噪音峰高的10倍,對應濃度作為其定量限濃度,并計算其定量限為50.30 ng。
2.7 精密度試驗
取同一批號下維生素K1凍干乳制劑,按“2.3”項下制成100 mg/L供試品溶液6份,各取20 μL進樣,記錄維生素K1色譜峰面積,計算峰面積的相對標準偏差(RSD)為0.02 %,表明本法精密度良好。
2.8 穩定性試驗
取對照品溶液(100 mg/L)置于室溫下,分別于0、1、2、4、6、8、12 h注入液相色譜儀,記錄主峰面積,計算RSD為0.28 %,表明維生素K1溶液在室溫放置12 h內穩定。
2.9 回收率試驗
取空白凍干乳,分別加入維生素K1約8、10、12 mg,按照供試品溶液制備項下方法操作,制得不同含藥量的維生素K1破乳液,每個濃度配制3份,分別進樣20 μL,測定峰面積,代入標準曲線換算成實際測定量,計算回收率,結果見表1。表1 回收率測定結果
2.10 含量測定
取維生素K1凍干乳樣品3批(批號:07010801、07010802、07010809),照“2.3”項下方法進行操作,得供試品溶液;另取對照品適量,照“2.2”項下方法進行操作,得對照品溶液。分別取供試品溶液與對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀,記錄峰面積,按外標法計算即得。3批樣品的含量測定結果為:104.38%±0.50%、103.38%±0.24%、102.68%±0.42%。
3 討論
凍干乳中由于有凍干保護劑糖類物質的存在,有機溶劑破乳時不能將其溶解,呈渾濁狀態。實驗中發現,先用水將維生素K1凍干乳重建呈乳狀液后再進行破乳,能獲得適于高效液相色譜儀分析的澄清溶液。
常用的破乳方法有甲醇、乙醇、異丙醇等破乳法[46],實驗發現甲醇及乙醇對本樣品破乳不完全,而異丙醇對主藥及乳化劑磷脂溶解能力強,破乳效果好,因此實驗中選用異丙醇為維生素K1凍干乳的破乳劑。本文所建方法樣品處理操作簡單,靈敏度較高,適用于維生素K1凍干乳劑的含量測定。
參考文獻
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[4] 李 欣, 劉 燕, 康艷敏, 等. 高效液相色譜法測定多西紫杉醇靜脈納米乳的含量[J]. 解放軍藥學學報, 2007, 23(1): 3234.
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患兒,張藍天,男,40 d,以“昏迷10 min”為主訴于2011年10月31日入院?;純合档谝惶プ阍马槷a,在鄉級醫院分娩,出生時無窒息搶救史,無外傷史。患兒半天前無明顯誘因開始哭鬧,吮奶差,不伴發熱,無嘔吐,無咳嗽。入院10 min前發現患兒四肢發涼,刺激無反應,故急來診。入院體檢:體溫不升,心率190次/min,呼吸60次/min,貧血貌,深昏迷,皮膚黏膜蒼黃。前囟0.8×0.8 cm,膨隆,雙瞳5 mm,等大正圓,對光反射消失。頸軟,雙肺呼吸音清晰,未聞及干濕性音。心律齊,心音有力,單心音,心前區可聞及Ⅲ級收縮期雜音。腹軟,肝肋下3厘米,質軟。生理性反射消失。抽血檢查發現抽血處流血不止,超過數分鐘。實驗室檢查:PT>100 s,KPTT>100 s,白細胞19×109/L,紅細胞2.35×1012/L,血紅蛋白78 g/L,血小板254×109/L。CT檢查所見:腦質密度普遍減低,灰白質界限消失,僅基底節區灰質核團及少許枕葉腦密度較高。左側側腦室大部閉塞,中線結構向右移位。入院后患兒排出帶血大便12次,急查大便潛血試驗陽性。追問病史,患兒出生時未注射維生素K1,生后單純母乳喂養。結合CT診斷:遲發性維生素K缺乏癥并顱內出血、消化道出血。入院后急給予維生素K巴曲酶止血,急行交叉配血,并給予氨茶堿維持呼吸,給予呋塞米,氟美松降低顱內壓,給予納洛酮減輕顱腦損害。入院后患兒一直處于深昏迷狀態,出現間斷抽搐。征求家屬意見后在手術室急行顱內血腫穿刺引流術,穿出10 ml血性液體。穿刺后患兒前囟張力有所緩解,未見明顯抽搐,但仍處于昏迷狀態。11月1日,家屬要求放棄治療后,患兒生命體征逐漸消失,宣布臨床死亡。
2 討論
遲發性維生素K 缺乏致顱內出血患者以新生兒和嬰兒為主,本病在臨床上發病急、病情重,合并顱內出血時預后不良,病死率高。其診斷和治療具有自身的特點,早期發現、及時的治療才可能達到治療目的[1]。本病例是由于家長對孩子異常表現未引起重視,入院時已出現腦疝表現,以致錯過治療時機,最終導致患兒死亡。維生素K缺乏引起的嬰幼兒顱內出血多見于3個月以內,純母乳喂養的嬰兒。由于母乳中維生素K的含量低,維生素K 經過胎盤的通透性差,孕母維生素K 很少進入胎兒體內,故嬰兒出生時血中維生素K 的水平普遍較低[2]。過去,人們對維生素K的認識不足,生后不常規肌內注射維生素K,所以維生素K 缺乏癥較常見。隨著社會的進步和醫學科學的發展,凡在正規醫院出生的新生兒均常規應用維生素K,故很少出現出血。但本病例中由于患者在鄉級醫院分娩后未常規應用維生素K,再加上生后又是純母乳喂養,所以其體內缺乏維生素K,導致顱內出血致死亡。所以應加強對邊遠農村地區優生優育政策的宣傳,建議孕婦最好去較大醫院分娩,倘若確實無能力接受規范先進的接生服務,建議產婦在孩子出生后及時給予注射維生素K,減少或阻止顱內出血[3]。
隨著母乳喂養率的提高,維生素K 缺乏有上升趨勢。特別是遲發性維生K 缺乏所致顱內出血發生率高,多數遺留有永久性神經系統后遺癥。對于這種可以預防的疾病,廣大醫務工作者應高度重視,加強對母乳喂養的指導,提高對本病的認識,采取預防性用藥措施:①產婦分娩前數周即口服維生素K 20 mg。②新生兒出生后立即注射維生素K1(0.5~1.0)mg/d,連用3 d;新生兒出生后3個月內,每周口服維生素K 1 mg[4]。③對有遲發性出血性疾病危險性的新生兒應預防性給予維生素K。需每天口服維生素K 1 mg或每月肌內注射維生素K 1次,以預防維生素K缺乏性出血癥。
參 考 文 獻
[1] 王文星.晚發維生素K缺乏致顱內出血42例臨床分析.中國醫學文摘兒科學,2008,1,27(6):470.
[2] 李彤,林若玲,李丹.114例新生兒消化道出血臨床分析.中國婦幼保健,2011, 26(13):1978-1980.
【關鍵詞】 維生素K缺乏;出血;嬰兒
[Abstract] Objective: To pay more attention to the prophylaxis of hemorrhage caused by deficiency of vitamin K. Methods:26 cases with hemorrhage caused by deficiency of vitamin K in our hospital were collected and analyzed. Results: The average age of these infants were 22.5 d and among them, 20 cases were breast feeding. The bleeding parts included gastrointestinal tract, intracalvarium, subcutaneous tissue and injection site. Conclusions: The infants fed by breast are more prone to suffer from hemorrhage caused by deficiency of vitamin K. Intracranial hemorrhage is the main type and often with unfavourable prognosis. The survivals usually are followed by lingering effects. So we should take more measures to prevent the hemorrhage caused by deficiency of vitamin K.
[Key words] Deficiency of vitamin K; Hemorrhage; Infants
1999年英、德、加、荷四國兒科代表國際出血與血栓協會附屬兒科委員會對與維生素K有關的新生兒出血癥進行了正式命名,建議用術語“維生素K缺乏性出血”取代以往的“新生兒出血癥”[1]。并定義了維生素K缺乏性出血的概念,是指由于維生素K缺乏導致維生素K依賴凝血因子活性低下、并能被維生素K所糾正的出血[1]。分為早發型、經典型、晚發型。晚發型引起的顱內出血是造成嬰兒傷殘的原因之一?,F對2002年2月~2007年5月在我院治療的26例維生素K缺乏性出血病例資料分析如下。
1 臨床資料
1.1 一般資料
本組患兒共26例,男16例,女10例;年齡最小10 h,最大56 d,平均日齡25.5 d;足月兒20例,早產兒6例;母乳喂養20例,混合喂養3例,牛乳喂養3例;早發型2例(消化道出血1例、臍殘端出血1例),經典型8例(消化道出血5例,合并皮膚淤癍2例;針刺“馬牙”致牙齦出血1例,注射部位出血2例),晚發型16例(消化道出血5例、腦室內出血3例、腦實質出血2例、蛛網膜下腔出血5例、外耳道及鼻腔出血1例)。
1.2 臨床表現
本組患兒主要表現為胃腸道出血(嘔血、便血)16例,臍出血6例,蛛網膜下腔出血5例,腦室內出血3例,腦實質出血2例,合并皮膚淤斑2例,注射部位出血2例,針刺“馬牙”致牙齦出血不止1例,外耳道及鼻腔出血1例,腦疝1例。本組試管法凝血時間15~30 min;血紅蛋白50~125 g/L 12例,紅細胞計數(1.8~5.0)×109/L 12例。
1.3 治療方法
全部病例入院時即給予維生素K1 5 mg、酚磺乙胺0.25 g靜脈注射,1次/d,連用3~5 d;新鮮冰凍血漿25 mL靜脈滴注,1次/d,連用3 d。出血嚴重時可給予立止血,合并貧血者輸新鮮血10~20 mL/kg。胃腸道出血者暫禁食,靜脈營養。根據伴隨癥狀對癥給予吸氧、止驚、降顱壓等治療,同時保證熱量的供應。
2 結果
26例患兒治愈18例,其中早發型2例及經典型8例均治愈;晚發型治愈8例,好轉4例(住院2~3 d后病情好轉自動出院),因經濟原因放棄治療2例,死亡2例(腦疝形成導致呼吸衰竭死亡1例,腦室內出血出現頻繁抽搐窒息死亡1例)。
3 討論
個人認為,新生兒出血癥概念不準確,因為新生兒出血癥晚發型有部分病例在新生兒期后出現(28 d以后,本組病例有10例在新生兒期后出現),和兒科學對新生兒分期的定義相抵觸,故概念稱為維生素K缺乏性出血更為準確。本病的特征為體內某些維生素K依賴凝血因子活力低下而導致的自限性疾病,根據發病年齡段不同分為早發型、經典型、晚發型。早發型維生素K缺乏性出血指發生于生后24 h以內的維生素K缺乏性出血,經典型維生素K缺乏性出血指新生兒出生1~7 d內發生的出血,晚發型維生素K缺乏性出血指出生后8 d,即超過了經典型維生素K缺乏性出血年齡段(1~7 d)發生的出血[1]。本組26例患兒即以此分類。早發型多見于生后24 h內發病,常見于孕母使用影響維生素K代謝的藥物,可表現為頭顱血腫、顱內、胸腔、腹腔內出血,但本組早發型2例主要表現為消化道及臍殘端出血。經典型多于生后2~3 d發病,常見的出血部位為臍殘端、胃腸道(嘔血或便血)、皮膚受壓及穿刺處,一般為少量及中等量出血,多為自限性,1周后出血者極少。晚發型多見于1月后發病,與某些因素如長期腹瀉和長期使用抗生素、肝膽疾患和母乳喂養等有關,顱內出血多見,做頭顱CT及頭顱超聲檢查可以明確顱內出血的部位、程度,預后不良,病死率及致殘率高。本組26例中發病年齡都在3個月內。實驗室檢查多有凝血酶原時間延長、血紅蛋白下降、血小板正常,也可使用酶聯免疫法檢測新生兒血中凝血酶原前體蛋白[2],凝血酶原前體蛋白是診斷的金指標,即使補充維生素K數日,PT正常后,仍可檢測到凝血酶原前體蛋白[1]。
維生素K缺乏性出血一般認為與下列因素有關: (1) 維生素K經過胎盤的通透性差,胎兒的維生素K要靠自身合成。由于胎兒肝功能不成熟,出生時肝內維生素K貯存量亦低,早產兒尤甚。(2) 人乳中維生素K的含量遠低于牛奶中的含量。母乳喂養者,維生素K缺乏性出血的機會是牛奶喂養者的15~20 倍。(3) 維生素K可由腸道細菌合成,其吸收需依賴膽汁的存在。新生兒初生時腸道無菌,奶量不足,影響維生素K的合成。新生兒的膽汁中膽酸含量低(尤其是早產兒) ,影響維生素K的吸收。(4) 其它繼發因素如:母體產前使用過抗凝劑、抗癲癇藥、抗結核藥等,可發生與維生素K競爭性抑制作用。因此要避免維生素K缺乏性出血的發生,就要早期預防、早期診斷,尋找致維生素K缺乏的原因以去除病因。在維生素K缺乏性出血的治療過程中及早發現顱內出血,積極治療,以達到最佳療效降低死亡率。
從本組26例維生素K缺乏性出血分析,純母乳喂養16例,占80%,而且大部分患兒來自農村等醫療條件較差的欠發達地區,有些患兒出生時未肌注維生素K1。母乳中維生素K含量僅有15 μg/dL,為牛乳的25%。母乳喂養兒腸道內主要為乳酸桿菌,合成維生素K少,致內源性維生素K產生不足[3],如合并有感染及使用抗生素后,則加速了晚發型維生素K缺乏性出血的發生,甚至危及生命。2例牛乳喂養兒有口服抗生素病史,抑制腸道細菌維生素K合成。其余2例病因不明。晚發型維生素K缺乏性出血的預后與出血部位及出血量有關,大部分患兒遺留有后遺癥。因此,預防由于維生素K缺乏引起的新生兒顱內出血對于減少嬰兒傷殘和病死率具有重要意義。
為了預防新生兒維生素K缺乏性出血,建議在出生時肌注維生素K1 1 mg。但20世紀90年代,有學者曾認為肌注維生素K1可能增加白血病和癌癥的幾率,主張口服維生素K1 1~2 mg,后經多年對照觀察證實,維生素K1無論肌注或口服均未增加癌癥發病率,而口服維生素K1卻有引起晚發型維生素K出血者,因此,仍主張以肌肉注射為妥[4]。另外可以通過母親口服維生素K以提高乳汁維生素K水平,而達到預防晚發型維生素K缺乏性出血的目的。預防方法是:新生兒出生時口服維生素K1 1mg,之后每周1 mg,共12次[1]。對于有高危因素的新生兒在出院前或滿月時再肌注1次維生素K1,以減少晚發型新生兒出血癥的發生。
參考文獻
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