膽管細胞癌
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膽管細胞癌范文第1篇
【中圖分類號】R735.8 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）07-4594-02
膽管細胞癌根據發病部位分為周圍型膽管細胞型肝癌、肝門型膽管細胞型肝癌和遠端膽管細胞癌.肝內周圍型膽管細胞癌 （Intrahepatic peripheral cholangiocarcinoma， IHPCC） 是肝內一種少見的原發惡性腫瘤，它的發病率僅次與肝細胞肝癌，而居第二位，占肝內原發性惡性腫瘤的 5%-15%[1]。 MRI 檢查是診斷IHPCC常用的有效檢查方法之一。本文通過分析經病理證實的 IHPCC 病例共計 35 例， 探討其 MR 表現特點及其病理基礎， 以期提高 MRI 對IHPCC 的診斷和鑒別診斷水平，對臨床醫生確定正確的治療計劃有重要指導意義。
1 資料和方法
1.1一般資料
搜集2013年1月～2014年1月在我院手術或穿刺活檢并經病理證實的IHPCC患者35例，男25例，女10例，年齡20～76歲， 平均48歲。病程 2周 -5年。臨床上主要表現為右上腹部疼痛飽脹、胸背痛、食欲不振、消瘦、間歇性鞏膜黃染、 乏力、畏寒發熱、或無痛性進行性黃疸伴有皮膚瘙癢等癥狀。部分患者有膽囊或膽道結石史，或因其他原因體檢時發現有肝內占位性病變。 35例中行手術治療者 （包括肝葉切除、剖腹探查）共計 29 例，6例行 B 超引導下肝穿刺活檢，全部病人均經病理學證實。
1.2檢查方法
儀器及方法 采用Siemens3.0T超導型磁共振機，采用相控陣體部線圈，平掃加強化三期掃描，對比劑Gd―DTPA。所有患者均依次行MRI平掃（軸位抑脂TSE T2WI、TIWI正反相位、冠狀的T2WI不壓脂、抑脂Precontrast T1WI）、動態增強：動脈期、門脈期、平衡期掃描（抑脂3D GRE T1WI即抑脂3D VIBE）。掃描時間：經肘靜脈注入造影劑后23～26s行動脈期掃描，50～60s行門脈期掃描，120～180s后行平衡期掃描。統計平掃MRI、增強MRI病灶檢出情況和病灶信號變化特點，總結典型病灶增強后MRI的表現。
2 結果
2.1 腫瘤部位及分型 35例中，病灶位于肝左葉 25例，位于右葉 10例。腫塊型19例、管周浸潤型11例和管內生長型5例。
2.2 MRI 表現 對 35 例MRI檢查病例進行分析， 在MR平掃上腫塊在T1WI上呈較均勻的低信號，在T2WI上呈不均勻性高信號。 MR 增強掃描 19例為腫塊型，早期以邊緣強化為主，延遲后內部呈不均勻性的斑片狀強化。11例為管周浸潤狹窄型，早期強化不明顯，延遲后逐漸呈均勻性強化， 周圍膽管壁亦有強化 ；其中2例在平掃和各期增強掃描上均未見明確的軟組織腫塊影，僅表現為肝內膽管擴張，因同時合并肝內膽管多發性結石，術前僅診斷為肝內膽管結石并膽管炎，未能做出IHPCC 的診斷。5例管內生長型表現為擴張膽管腔內軟組織結節，注射造影劑后結節有增強。此外有 5例腫塊型在腫塊周圍未見任何肝內膽管擴張，術前影像上均未做出正確診斷，分別診斷為肝細胞肝癌 3 例 、肝血管瘤和肝膿腫各 1 例。
3 討論
IHPCC 起源于肝內小膽管或末梢膽管上皮細胞，病理組織學上多為分化型腺癌（多數為導管狀腺癌， 少數為狀腺癌和黏液腺癌）。IHPCC 的生長方式有三種類型：腫塊型、膽管周圍浸潤型和膽管腔內生長型 。 組織學上腫塊主要由惡性腫瘤細胞、 纖維組織、 凝固性壞死和粘蛋白構成，鏡下表現常為未分化或分化很差的腺癌，可分泌黏液。在腫瘤的外周主要由大量的腫瘤細胞和少數纖維組織構成，而在腫瘤的中央區主要由纖維組織構成，腫瘤細胞在其中分布稀疏或集結出現。腺癌的腫瘤細胞是產生腫瘤早期強化的病理基礎， 而纖維組織是產生腫瘤延遲強化的病理基礎， 因為造影劑進入纖維組織中相對緩慢，并在其中較長時間滯留。造影劑在纖維組織間質與血管之間彌散慢，這是肝內膽管細胞癌門脈期進一步強化及延遲期強化的病理基礎[1、2、3]。
IHPCC 的生長方式和組織學特點的不同， 所以影像學上表現的也是復雜多樣的。腫塊型 主要表現為肝內類圓形、分葉狀及不規則形軟組織腫塊，在 MRI 掃描上呈長T1、長T2 信號特點， MRI 上腫塊周圍可伴有或無肝內膽管擴張。 增強掃描早期瘤周邊出現輕度 - 中度強化，早期腫塊中央多數無強化，或僅表現為輕度片狀或條索狀強化。延遲掃描中央部分強化逐漸明顯，可呈斑片狀、條狀、分隔狀甚至均勻強化[1、3]。本組 19例腫塊型病變在延遲期腫塊呈中度-明顯強化，其中9例呈均勻性強化。管壁浸潤型以遠端肝內膽管擴張為其明顯的主要表現，有時腫瘤本身表現并不明顯， 僅表現為局限性的膽管壁增厚， 在周圍擴張膽管的襯托下顯示出中間無管腔結構的腫瘤輪廓。影像學上此種類型的腫瘤在平掃和增強掃描中可以見不到明確的軟組織腫塊，而擴張膽管的斷端形態特點對診斷本病具有重要的意義，尤其是在 MRI 上，遠端膽管呈“軟藤狀”進行性擴張[1、3]。增強掃描本組11例均出現線樣或網格狀增強，較具特征性。腔內生長型膽管癌主要表現為擴張的膽管腔內結節狀、狀軟組織腫塊影。增強掃描早期僅表現輕中度強化，延遲后因腫瘤內部缺乏纖維組織成分而無延遲后強化。腫塊較大時可完全堵塞膽管腔，造成遠端膽管的明顯擴張[1、3]。本組5例腔內生長型表現為擴張膽管腔內軟組織結節，注射造影劑后結節有增強。
病灶處肝臟包膜出現萎縮被認為是 IHPCC 的特征性表現，其原因可能與膽管炎產生的纖維疤痕組織收縮有關。 此征象對于診斷和鑒別診斷有重要參考價值[3]。本組的發生率為 46%。在肝內其他原發或繼發性腫瘤中很少見到肝臟包膜萎縮現象。
病灶周圍膽管擴張是 IHPCC 重要的間接征象[1、2]，本組除5 例在腫瘤周圍未見有任何程度的肝內膽管擴張外其余均見膽管擴張。
肝內膽管細胞癌多數表現為肝內腫塊，故必須與肝內其它占位性病變鑒別。
3.1 肝細胞癌：大多有慢性肝病、肝硬化病史，AFP升高，動脈期早期強化， 其典型強化特征為“快進快出”， 門脈期和延遲期掃描大多數病灶為低信號，常有門脈癌栓形成。本組肝內膽管細胞癌所有病例AFP為陰性；肝動脈期及門脈期輕度的、不完整的邊緣強化與延遲期的延遲強化的一個典型征象，有助于鑒別。
3.2 肝血管瘤：典型的血管瘤在T2WI上呈典型的燈泡征，增強特點為早期從周邊開始呈結節狀或環形強化， 逐漸向中心擴展， 延遲期等信號或高信號充填。
3.3 肝膿腫：多呈環形壁強化，且壁周有低信號水腫帶，形成“暈環”，到延遲期病灶液化區更為明顯。臨床有發熱、白細胞增高等，鑒別一般不難。
3.4 單發性轉移瘤：有原發腫瘤病史，CT增強多呈環形強化，中心壞死而形成“牛眼征”。
綜上所述，MR平掃表現為不規則T1WI稍低或低信號，T2WI稍高或較高信號腫塊，無假包膜，病灶所在肝葉萎縮或/和肝包膜回縮征，腫瘤周圍膽管擴張、增強后特征性的延遲強化，臨床上本病無肝硬化，AFP不高，則應傾向于肝內膽管細胞癌的診斷。
參考文獻：
[1] 周康榮，陳祖望.體部 MR I [ M] .上海：上海醫科大學出版社，2000.845 -850
膽管細胞癌范文第2篇
【關鍵詞】膽管細胞性;肝癌;臨床特點
【中圖分類號】R758【文獻標識碼】A【文章編號】1044-5511（2011）11-0104-01
原發性肝癌按病理分為肝細胞性肝癌和膽管細胞性肝癌,肝內膽管細胞性肝癌又叫周圍型或者末梢型膽管細胞型肝癌，是由于肝內膽管上皮細胞發生的惡性腫瘤,無高危人群和特異性臨床癥狀和體征，術前正確診斷率較低 發生率低, 常與膽管結石、膽管囊腫、潰瘍性結腸炎并發，早期很少能夠發現，在臨床診治時容易誤診漏診［1］。膽管細胞性肝癌占肝癌發病率10%［2］，本文對我院收治的肝內膽管細胞性肝癌患者進行臨床特點分析，總結如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料:選擇我院2000年1月―2009年9月經手術探查確診肝內膽管細胞性肝癌的患者40例，年齡30―76歲，平均年齡56歲，其中男性患者26例，女性患者14例，肝功能分級：A 級39例，B級11例.肝右葉19例，肝左葉13例，左、右葉均受累8例。病灶直徑2―10cm，平均6.2cm。患者臨床表現為不同程度的腹痛、飽脹不適、黃疸、食欲減退、肝腫大、畏寒發熱等癥狀。
1.2診斷：術前診斷為肝內膽管細胞性肝癌10例，其余誤診為肝細胞癌8例，肝囊腫3例，膽結石伴肝內炎癥包塊9例，肝膿腫5例，肝內多發小膿腫伴肝管結石5例。
2結果
本組40例肝內膽管細胞性肝癌患者，伴有肝硬化患者5例（12.5%），有乙肝病史患者14例（35.0%），伴有肝內外膽管結石患者15例（37.5%），HBsAg陽性8例（20.0%），AFP陽性8例（20.0%） ，CA19-9陽性28例（70.0%），CEA升高11例（27.5%）。B超檢查發現占位性病變18例（45.0%），明確考慮為惡性腫瘤4例（10.0%），29例行CT檢查發現占位性病變22例（75.9%），15例行MRI檢查發現占位性病變13例（86.7%），均明確考慮為膽管源性惡性腫瘤。治療方法采取外科根治性手術和姑息性手術切除，其中外科根治性手術22例（55.0%），左肝葉切除9例 ，左三葉切除8例，不規則切除5例，1年、3年、5年得生存率分別為86.4%，45.5%，40.9%；姑息性手術切除18例（45.0%），1年、3年、5年得生存率分別為22.2％，11.1％，5.56％．兩種治療方式比較具有顯著性差異。
3討論
原發性膽管細胞性肝癌無明確的地域分布，與肝炎病毒感染和肝硬化等也無明確相關［3］，患者通常臨床表現為不同程度的腹痛、飽脹不適、黃疸、食欲減退、肝腫大、畏寒發熱等癥狀，HBsAg多為 陰性，AFP也不升高，容易排除惡性腫瘤，導致誤診。 膽管細胞性肝癌的發病 機制尚不明確，一般認為與肝內膽管結石、膽道感染、原發性硬化性膽管炎、膽道畸形、寄生蟲感染有關，在影像學方面，肝內膽管癌表現為B超檢查膽管細胞性肝癌結締組織豐富，常見高回聲［4］，CT檢查病灶位于肝周邊，低密度的占位病變，內有不規則囊性低密度區，邊界模糊不清楚，外形不規則，周圍膽管擴張，呈病灶包繞征 。CT和 MRI均有較高的診斷價值，本組患者經CT和MRI檢查診斷率為75.9%、86.7%，對于經B超、CT、MRI檢查肝占位的患者，CA19-9和CEA升高則考慮膽管細胞性肝癌的可能，原發性膽管細胞性肝癌通常伴有肝內膽管結石、早期的肝門和腹腔淋巴結轉移的影像學特點。本組患者治療方法采取外科根治性手術和姑息性手術切除，其中外科根治性手術1年、3年、5年得生存率分別為86.4%，45.5%，40.9%，與姑息性手術切除比較具有顯著性差異。總之，膽管細胞性肝癌是不同于原發性肝細胞癌，也不同于其他部位的膽管癌，患者發病隱匿、臨床癥狀不典型，在病因、影像學都有其特殊性，缺乏特異性檢查方法，確診時多數為癌癥中后期，根治切除率低，患者預后差，所以，針對本病關鍵是要及早發現，診斷治療，尤其伴有膽管結石、膽道感染等癥狀的患者及時行B超、CT、MRI檢查，避免誤診、漏診，首選根治性切除手術治療，避免腫瘤擴散、轉移 。
參考文獻
［1］劉志剛，錢葉本，耿小平. 膽管細胞性肝癌和肝細胞性肝癌臨床比較［J］．臨床外科雜志，2006，12.12(814)：786-788.
［2］蔣訓歸，何云，歐陽正晟. 原發性膽管細胞性肝癌與肝細胞性肝癌的臨床觀察［N］．中國醫藥導報，2011,1.1(8)：19-20.
膽管細胞癌范文第3篇
【關鍵詞】:肝內膽管細胞癌;CT;診斷
【中圖分類號】R735.8【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)06-191-2
肝內膽管細胞癌(intrahepatic cholangiocareinoma,ICC),指起源于肝內膽管二級以遠的上皮細胞的惡性腫瘤,約占全部膽管細胞癌的10%和肝內惡性腫瘤的5%～10%。與原發性肝細胞癌有很大差別,臨床表現及實驗室檢查均無特異性,術前診斷較為困難,且手術切除為本病唯一有效的治療方法,但其CT診斷有一定特征性,故影像學檢查對其早期發現和治療有重要的意義。我院自1998年收集病例累計11例,結合病理探討其CT表現特點,以期以提高對本病的術前診斷和鑒別診斷水平。
1材料與方法
1.1臨床資料
本組11例,男4例,女7例。年齡32～65歲,平均50歲。病程3～20月,主要癥狀為上腹痛(9例),胸背痛(1例),嘔血(1例),黃疸出現較晚且進行性加重(5例),其他表現有乏力、食欲不振、消瘦、發熱、及皮膚瘙癢等。實驗室檢查:11例AFP結果陰性。
1.2CT檢查
本組11例作全肝CT平掃,其中7例作增強掃描,層厚/層距10mm,或層厚8mm/螺距115,經肘前靜脈團注非離子型造影劑(歐乃派克或碘海醇300mgI/ml)100ml,速度215ml/s。所用CT機為Somatom AR T普通CT機或SIEMENS PLUS4螺旋CT機。
2結果
2.1CT平掃11例中,6例為單發病灶,5例為多發病灶。7例位于肝左葉,4例位于肝右葉,病灶大小為5～10cm,平均718cm。4例左、右葉均可見病灶,病灶大小不一,最大者約910cm×410cm。肝內膽管擴張8例,右葉3例,雙側5例,其中1例為肝內外膽管囊狀擴張,膽囊增大,膽管及膽囊內均見多發結石,在擴張膽管周圍見大片低密度區,見圖1。合并肝內膽管結石5例。肝葉萎縮6例,其中右葉1例,左葉5例。病灶局部肝輪廓凹陷6例。
2.2 增強掃描5例行動脈期、靜脈期及平衡期三期增強掃描,2例病灶還行3min延遲掃描。根據增強后密度低于、等于或高于肝實質密度分為輕、中、重度強化,增強前后密度無明顯變化為無強化。多發病灶以其最大者進行觀察。病灶邊緣輕中度不規則細線狀強化6例,1例邊緣早期無強化而后呈逐漸強化。原平掃呈等或稍低密度區,增強后呈輕度片狀、結節狀強化2例,中度結節狀強化3例;輕度線狀強化1例,見圖2。4例病灶在三期內的強化情況無明顯變化,1例呈“快進快出”,1例為緩慢增強。平掃所見的大片低密度區在三期掃描內強化很輕或無,因此在增強圖像上顯得密度更低,病灶顯示亦清晰。2例延遲掃描中,1例邊緣早期無強化,而呈“延遲強化”,于延遲掃描時出現明顯強化:病灶密度高于肝實質密度,見圖3。另1例邊緣早期網格狀明顯強化,延遲時病灶內仍見片狀明顯強化。增強后可分辨出擴張的膽管,呈小圓點或條狀水樣密度影;3例于病灶內可見擴張膽管。其他表現有:門靜脈受壓、移位3例,門靜脈癌栓1例(左支)。
圖1 CT平掃肝內膽管明顯囊狀擴張,內有多個結石影;其周圍大片肝密度降低,邊界不清
圖2 CT增強掃描:病灶內明顯線狀強化
圖3 CT增強掃描
3討論
3.1肝內膽管細胞癌的CT表現特點
CT平掃上,肝內膽管細胞癌通常表現為不規則形腫塊,密度較低,邊緣可以清楚,也可不清。由于膽管細胞癌起源于膽管,因此易導致膽管阻塞和破壞,引起膽管擴張。增強掃描表現多樣。腫瘤早期邊緣部增強是一常見征象,可能是由于腫瘤邊緣部的血管相對較多。此外,由于屬于乏血供腫瘤,因此容易出現變性、壞死,壞死區常較大;其邊緣殘存的纖維間質帶是形成無強化區邊緣部條索狀強化的基礎,若局部門脈被腫瘤包圍,增強掃描時造影劑充填門靜脈,而使得腫瘤呈線樣強化或網格狀強化;若門脈與擴張的膽管伴行,增強時顯示清楚,可有受壓、移位。本組見病灶內線樣強化3例,網格狀強化2例,病灶周圍門靜脈受壓移位3例,門靜脈癌栓1例。
3.2病理基礎
肝內膽管細胞癌來源于肝內小膽管或末梢小膽管,在大體標本上腫塊呈灰色,比肝細胞癌質硬,壞死多見,無肝炎及肝硬化病史。膽管細胞癌具有腺癌的一般特征,染色淺淡內無膽汁滴,在癌細胞內、腺管內或間質中,常見伴有粘液分泌。癌細胞中纖維結締組織豐富,部分病灶可見到鈣化。
肝內膽管細胞癌在病理組織學上多為分化型腺癌,中心可有致密的纖維條索,可有壞死囊變,可見衛星灶,病理分為巨塊浸潤型,多巨塊型,單結節型和多個小結節型,組織學為有較多纖維間質腺癌,癌細胞可分泌粘液及鈣化,腫瘤呈浸潤方式向周圍生長擴展,轉移至周圍組織器官。病理上門脈期逐漸增強及延遲期強化區為大量纖維結締組織,少量散在的癌組織[2]。所有病例AFP為陰性,與乙肝、肝硬化無直接關系。由于膽管細胞癌易發生在淋巴管豐富的匯管區,所以淋巴結轉移的發生率較高。膽管細胞癌雖然多數瘤體較大但很少發生門脈癌栓形成。
3.3鑒別診斷
3.3.1肝細胞癌:增強掃描是區別二者的重要手段,后者與乙肝病毒感染有關,往往有肝硬化的基礎,且發病年齡較輕,70%有AFP升高,增強曲線為“速升速降”型,邊界往往較清楚(多有完整包膜),常有門靜脈癌栓形成。
3.3.2肝血管瘤:肝內膽管細胞癌增強后有時較平掃時縮小,而且二者強化持續峰值都很長且邊緣強化,但是增強時動脈期血管瘤邊緣呈結節樣明顯強化,由邊緣到中央集中,密度與同層面較主動脈接近,延遲期血管瘤延遲期大部分或全部被造影劑充填。膽管無擴張等。
3.3.3肝轉移瘤:延遲掃描對鑒別診斷至關重要,有原發灶及病史,常為肝內多發類圓形病灶,環形強化,延遲掃描強化不明顯。中心壞死可形成“牛眼征”
3.3.4肝膿腫:臨床有發熱,白細胞升高,CT上往往出現多層環形的不同密度帶,一般不難鑒別。影像上肝內膽管細胞癌確診較為困難,在詳細分析CT表現的基礎上,應結合臨床資料,尤其是膽石術后黃疸復發或未減輕者應高度警惕。當平掃征象不典型時,加用增強掃描尤其是延遲掃描有助于診斷,或必要時行病灶穿刺活檢。
綜上所述,肝內膽管細胞癌CT表現有一定的特征性,在實際工作中,既要詳細分析CT表現又要結合臨床資料,注意與肝細胞肝癌、血管瘤、肝膿腫等其它肝臟疾病鑒別,對肝內膽管細胞癌做出正確的診斷,必要時需肝穿刺活檢定性。
參考文獻
[1] 吳恩惠,主編.醫學影像診斷學[M].北京:人民衛生出版社,2001,654.
[2] 梁長虹,胡景,關月歡,等.周圍型肝內肝管癌的CT影像診斷[J].中華放射學雜志,1993,27(12):869.
[3] 周康榮,主編.腹部CT[M].上海:上海醫科大學出版社,1993.43-44.
膽管細胞癌范文第4篇
[關鍵詞] 塞來昔布；膽管細胞癌；放療；survivin基因
[中圖分類號] R735.8 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）10-0019-03
膽管細胞癌是膽道系統常見的惡性腫瘤，因其解剖位置特殊，早期診斷較困難，可手術切除的患者不到20%，放化療是中晚期患者主要治療手段，但放療效果受到腫瘤敏感性的限制。塞來昔布作為一種COX-2抑制劑，在近年研究中被認為具有抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡的作用[1，2]。本研究探討體外條件下塞來昔布對接受X線放療的人QBC939細胞凋亡的作用及可能機制。
1 材料與方法
1.1 材料及細胞培養
QBC939人膽管癌細胞株購自中國科學院上海生命科學研究院細胞庫，塞來昔布購自南京德寶生化有限公司，細胞培養基為含10%胎牛血清的1640培養基，兔抗人survivin多克隆抗體及β-actin購自Santa-Cruz公司，CCK-8試劑盒、Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒購自碧云天生物科技研究所。細胞培養條件：37℃、5%CO2的培養箱。實驗設計及研究時間2012年1月～2013年1月。
1.2 CCK-8法檢測細胞生長
取傳代培養的對數生長期QBC，939細胞制成1×105個/L細胞懸液，種植在96孔板中，每孔100 μL。設為調零組（不含細胞的培養液），對照組（常規培養細胞，不接受塞來昔布及放療），實驗組（分別加入濃度為25 μmol/L、50 μmol/L、75 μmol/L、100 μmol/L的塞來昔布，X線放療劑量分別為2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy、10 Gy），實驗組每組設10個復孔。培養48 h后實驗組每孔加CCK-8試劑10 μL，再培養2 h后，用酶標儀在450 nm波長下測定每孔的吸光度，計算細胞增殖抑制率，并進一步計算出塞來昔布的IC50=64.2 μmol/L。在后續實驗中選擇濃度65 μmol/L塞來昔布。X線放療的IC50為5.83 Gy，選擇劑量6 Gy用于后續實驗。抑制率=（1-實驗孔OD值/對照孔OD值）×100%。
1.3 流式細胞術檢測
將實驗分為四組，每組樣本數為10，分組設置如下：對照組單純培養細胞；塞來昔布組（C組）加入濃度65 μmol/L塞來昔布；放療組（R組）給予劑量6 Gy X線照射；塞來昔布聯合放療組（C+R組）先給予濃度65 μmol/L塞來昔布24 h后更換培養液，再給予劑量6 Gy的X線照射細胞，各組細胞均培養48 h，收集細胞并離心，按試劑盒說明書進行檢測，凋亡細胞的比例由Cell Quest Pro 軟件計算，實驗重復3次。
1.4 Western blot蛋白檢測
收集上述各組細胞，每組樣本數為10，加入細胞裂解液，提取總蛋白，調整各組總蛋白，使各組總蛋白濃度相同。經15%SDS-PAGE電泳后電轉移至PVDF膜，封閉后加入一抗（兔抗人survivin多克隆抗體），工作濃度為1∶1000，再加入二抗（辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗體），工作濃度為1∶6000。同樣方法進行內參蛋白（β-actin）的抗體孵育。發光、顯影、定影后制成膠片，掃描后用凝膠圖像處理體統分析目標條帶的凈光密度值。
1.5 統計學分析
采用SPSS18.0統計學軟件進行處理，計量資料以均數±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，P
2 結果
2.1 細胞的凋亡率
如圖1所示每組細胞的流式圖，結果顯示聯合組的凋亡率明顯高于對照組、塞來昔布組及放療組（P
2.2 Survivin蛋白的表達
聯合組survivin蛋白表達較其他各組要明顯減弱（圖2），用相關軟件計算出各條帶的灰度值，將目的蛋白survivin/β-actin灰度值作為最終結果，以x±s表示（表1），多組之間比較差異有統計學意義（P
3 討論
放射療法作為治療腫瘤的一種傳統手段，其療效受到腫瘤放療敏感性的限制。目前研究發現大部分腫瘤對輻射并不敏感，在很大程度上影響了放療效果。如何通過提高腫瘤的放射敏感性以提高放療療效，是近年來研究的熱門之一。塞來昔布是一種環氧化酶-2（COX-2）選擇性抑制劑，其放射增敏作用在近年研究中受到重視[2-4]。研究發現，環氧合酶-2（COX-2）在上皮組織癌（包括胃癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、皮膚的鱗狀上皮細胞癌等）中廣泛存在且過度表達，在腫瘤的發生、發展中起著重要作用[4]。COX-2促進前列腺素E2（PGE2）生成，而PGE2具有放射保護作用，而放射治療在殺滅腫瘤細胞的同時誘導腫瘤細胞高表達COX-2[4，5]。塞來昔布屬于非甾體類抗炎藥（NSAIDs），是一種選擇性環氧化酶抑制劑，可通過抑制環氧化酶-1及環氧化酶-2來阻止花生四烯酸向前列腺素轉化，從而阻止PGE2的放射保護作用，發揮放射增敏劑的作用。研究發現，塞來昔布作為一種新型COX-2選擇性抑制劑，可明顯降低消化道腫瘤的發病率[4]，塞來昔布通過抑制腫瘤細胞放射損傷的修復，改變腫瘤細胞的周期分布，抑制腫瘤新生血管形成以及誘導腫瘤細胞凋亡等機制，在聯合放射治療可提高放療療效，增強腫瘤細胞對放射的敏感性[5-7]。聶亮琴[7]等將正常少突膠質細胞（oln93）及腦膠質瘤細胞（u373）分別按空白處理、單獨接受塞來昔布或X射線、塞來昔布聯合X射線4種不同處理方式研究塞來昔布的放射增敏作用及其作用機制，發現塞來昔布能抑制oln93細胞和u373細胞生長，膠質瘤細胞組放射增敏比高于正常膠質細胞組，并誘導膠質瘤細胞G0/G1期阻滯，聯合組與照射組比較，u373細胞發生G2/M期阻滯，Cyclin B1、DNA-PKcs、MRE1l蛋白表達下降，提示塞來昔布對u373的放射增敏作用比oln93細胞明顯，其機制與調節細胞周期分布及DNA損傷修復有關。
Survivin基因作為凋亡抑制家族的重要成員，是目前發現最強的凋亡抑制基因，survivin表達與腫瘤預后、放化療敏感性密切相關[8-11]。survivin與環氧化酶-2表達的關系是塞來昔布作用機制研究的方向之一。夏歷[12]等研究發現在胃癌組織中survivin的表達與COX-2相關。李偉忠等[13]通過研究環氧化酶-2抑制劑塞來昔布對人舌鱗癌Tca8113細胞COX-2、survivin表達的影響及誘導細胞凋亡的作用，發現塞來昔布下調survivin mRNA及其蛋白表達的同時抑制COX-2蛋白的表達，但對COX-2 mRNA表達的抑制作用較弱，提示COX-2抑制劑塞來昔布下調survivin表達的作用可能與抑制腫瘤細胞生長等作用有關。方雷[14]等通過設計合成survivin 的 siRNA 序列并轉染等方式研究survivin基因沉默對人胃癌MGC-803細胞增殖及對化療藥物塞來昔布敏感性的影響，發現 survivin基因沉默48 h后，MGC-803細胞的survivin基因和蛋白表達明顯降低（P
使用塞來昔布來降低survivin的表達從而增加放療的敏感性是本研究的設想之一。有研究發現在肝細胞癌中，PGE2可以激活EGFR/PI3K途徑，通過EP1受體來上調survivin的表達[15]。本研究中，Western blot法檢測到survivin蛋白的表達在聯合組中明顯下降，提示在QBC939細胞株中，塞來昔布可以加速survivin蛋白的分解或降低survivin的mRNA表達。本研究結果顯示，聯合組的凋亡率明顯高于對照組、塞來昔布組及放療組，由此我們可以推斷，塞來昔布可以下調survivin表達，發揮放療增敏作用。
本研究通過塞來昔布聯合放療作用于人膽管癌QBC939細胞株，顯示塞來昔布能增強放療的敏感性，提高腫瘤細胞凋亡率，其機制之一可能是抑制survivin表達。本研究對膽管癌的治療提供了一種新思路，但是仍需更多研究來證實。
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膽管細胞癌范文第5篇
[關鍵詞] 肝細胞癌；乙型肝炎病毒X蛋白；肝炎病毒；生存素；凋亡
[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2011）12（b）-022-03
The significance and relationship between HBx protein and survivin portein expression in hepatic cellular cancer
CHEN Jiang, CUI Bin, JIANG Hanguo
Department of Oncology, the people's Hospital of Lianjiang City, Guangdong Province, Lianjiang 524400, China
[Abstract] Objectve: To investigate the effect of HBx protein and survivin protein in the expression of hepatic cellular cancer. Methods: The expression of HBx and survivin protein in hepatic cellular cancer tissues of 58 patients were detected by immunohistochemistry method, the protein was colorated by DAB, the positive pathological section of HBx and survivin in hepatic cellular cancer was taken as positive control, while PBS was taken as blank control. Results: The positive rates of HBx and survivin were 46.6% (27/58) and 69.0% (40/58) respectively. The positive rate of survivin in HBx-positive group was 70.4% (19/27) and 27.5% (11/40) in HBx-negative group, the differences were significant (P＜0.05). The expression of survivin protein and HBx protein was significantly related with differentiation of hepatic cellular cancer, metastasis and serum alpha-fetoprotein (AFP) level. Conclusion: HBx protein can promote the expression of survivin protein and the development of hepatic cellular cancer in the carcinogenesis of hepatic cellular cancer.
[Key words] Hepatic cellular cancer; HBx; Hepatitis virus; Survivin portein; Apoptosis
乙型肝炎病毒感染影響到全球近4億人口，是肝細胞癌（hepatic cellular cancer，HCC）最重要的獨立危險因素。乙型肝炎病毒是3.4 kb的DNA病毒，含有4個部分雙鏈的開放讀碼框，編碼C、S和X蛋白及病毒DNA聚合酶，其中X蛋白（HBx）已明確和腫瘤發生有關。X蛋白是一種多功能蛋白，通過一種未知的機制使細胞分裂及死亡發生調節障礙，HBx缺乏轉變活性，但可以使肝臟表達HBx的易感品系的轉基因小鼠發生肝細胞癌[1-2]。生存素是一種新近發現的在人類大部分腫瘤組織中表達的一種抗凋亡蛋白，其主要作用是凋亡抑制及細胞周期調節。本試驗通過免疫組織化學方法檢測二者在HCC組織的表達，探討其在HCC發生中的作用。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取2000年2月～2010年5月我院外科手術切除的HCC標本58例，臨床和病理資料完整。患者均未經過任何抗腫瘤治療，其中，男46例，女12例；年齡23～86歲，中位年齡60歲；Edmondson病理分級：1～2級16例，3級以上42例。47例AFP增高，伴有門靜脈癌栓18例，腹腔淋巴結及遠處轉移9例。所有組織標本均經10%甲醛固定，石臘包埋，5 μm連續切片。
1.2 方法與試劑
HBx蛋白抗體和人生存素（FL-142）單抗及S-P試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化采用S-P方法，操作步驟如下：石蠟切片脫蠟至水；3% H2O2室溫孵育5～10 min；微波抗原修復；正常山羊血清封閉，室溫15 min，滴加p53和生存素抗原工作液，冰箱內4℃過夜；PBS沖洗，滴加第二代生物素，標記二抗工作液，室溫20 min；PBS沖洗，滴加第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，室溫20 min；PBS沖洗，DAB顯色，自來水沖洗，蘇木素復染，封片。已知的肝癌HBx及生存素陽性切片為陽性對照，磷酸鹽緩沖液（PBS）作為空白對照。
1.3 結果判斷
觀察每張切片至少有5個具有代表性的高倍視野，不少于1 000個細胞，HBx和生存素均以胞質或胞核出現棕黃色顆粒為陽性染色，這樣的細胞大于或等于100個為陽性，對免疫組化結果進行評估。HBx陽性表達定位于細胞核（圖1），生存素陽性表達定位于細胞質（圖2），均呈棕黃色。
圖1 HBx陽性表達（S-P×200）
圖2 生存素陽性表達（S-P×200）
1.4 統計學方法
采用SPSS 13.0軟件進行統計學分析，計數資料用百分率表示，采用χ2檢驗，相關分析采用spearman等級相關系數，以P＜0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 肝細胞癌組織中乙型肝炎病毒X蛋白及生存素的表達及關系
HBx的陽性表達信號多為核型，生存素的陽性表達定位于細胞質，均呈黃色顆粒。HBx的陽性率為46.6%（27/58），生存素的陽性率為69.0%（40/58），差異有統計學意義（χ2=5.365，P＜0.05）；HBx陽性的HCC組織生存素的陽性率為70.4%（19/27），HBx陰性的HCC組織生存素的陽性率為27.5%（11/40），差異有統計學意義（χ2=8.673，P＜0.05）。等級相關分析表明，HCC組織中HBx和生存素的表達呈正相關（r=0.413，P＜0.05）。見表1。
2.2 乙型肝炎病毒X蛋白及生存素表達與肝細胞癌臨床病理參數的關系
HBx在HCC組織中的陽性表達率與Edmondson分級相關（r=0.432 7，P＜0.05）；Ⅰ～Ⅱ級陽性率為18.8%，≥Ⅲ級陽性率為57.1%。有門靜脈癌栓者的陽性率（66.7%）明顯高于無門靜脈癌栓者（37.5%），差異有統計學意義（P＜0.05）；AFP增高者HBx的陽性率明顯高于正常者，差異有統計學意義（P＜0.05）；HBx的表達與有無轉移無關（r=0.235 4，P＞0.05）。生存素在病理分級差、有門脈癌栓及轉移和伴有AFP高的HCC組織中的陽性表達率明顯高于病理分級好、無門脈癌栓及轉移和不伴有AFP高的HCC組織的陽性表達率。見表1。
3 討論
嗜肝病毒科的來源于哺乳動物的正嗜肝DNA病毒具有表達X蛋白的功能，X蛋白的結構與宿主細胞DNA糖基化酶功能結構域具有同源相似特點，而DNA糖基化酶是DNA復制時堿基切除修復的主要酶[3]。在乙型肝炎病毒誘發的肝細胞癌的過程中X基因經常與肝細胞DNA整合，HBX促進細胞周期進程，使抑制細胞生長的調節因子失活，與p53及其他腫瘤抑制因子及衰老相關因子結合并抑制其功能。近年研究表明，HBX調節轉甲基酶轉錄，使DNA局部甲基化導致抑癌基因沉默或者使DNA全部甲基化造成染色體不穩定，從而在肝癌發生中起作用。抗凋亡作用與p53抑制有關，促進凋亡作用機制不明。HBX能夠增加端粒酶逆轉錄酶的表達及端粒酶的活性從而延長肝細胞壽命有利于惡變，羥基末端去除的HBX失去了抑制細胞增殖及促進凋亡性能，增強了其調控癌基因的功能，使胰島素樣生長因子調節異常，促進增殖及凋亡抑制，使細胞生長失控[4]。
生存素是人類基因組中的腫瘤特異性基因，正常的成人組織罕有表達，在大部分人類腫瘤中高表達。生存素含有特征性的鋅指結構稱為BIR結構域，屬于凋亡抑制蛋白（IPA）家族成員之一，其他凋亡抑制蛋白家族成員的凋亡抑制是直接與細胞內半胱天冬酶結合抑制其活性，生存素不能直接與半胱天冬酶結合，乙肝病毒X蛋白相互作用蛋白（HBXIP）作為輔助因子在生存素引發的凋亡抑制起一定作用[5]。HBX蛋白的C末端與HBXIP結合再與生存素結合形成復合物，該復合物可以與前半胱天冬酶-9結合，從而阻止其募集到凋亡前酶活化因子（Apaf-1）上，使生存素借助細胞色素C介導的凋亡途徑選擇性地抑制半胱天冬酶的蛋白酶活性，在細胞凋亡中發揮橋梁作用[6]。
本研究顯示，HBX上調生存素的表達，提示肝細胞癌發生凋亡抑制。另外，HBx蛋白可與p53蛋白結合并使其失活，而生存素基因是一個被野生型p53基因抑制的基因[7]，HBx蛋白上調生存素在肝細胞癌中的表達形成凋亡抵抗，本研究結果證明了這一點。病理分級分化差，伴有門脈癌栓及AFP增高有轉移者HBx及生存素表達上調，表明HBx及生存素表達與肝細胞癌的惡性程度疾病進展有關。HBx上調生存素表達使細胞周期調控失常，凋亡障礙增殖過度，可能是乙型肝炎病毒感染引起肝細胞癌原因之一。
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