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TK對腦缺血NGF的影響研究

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TK對腦缺血NGF的影響研究

本文作者:邊穎1王金春1商艷君2作者單位:1.沈陽市第五人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)一科2.遼寧工業(yè)大學(xué)醫(yī)院內(nèi)科

檢測指標及方法

1神經(jīng)功能缺失評分

實驗前先對大鼠進行訓(xùn)練,采用神經(jīng)損傷評分[4](NSS)。術(shù)后第1天,NSS8~12分的大鼠進入本實驗。術(shù)后第1、3、7天,對3組大鼠進行評分及方差分析。

2腦梗死體積測定

將大腦由額極至枕極分為5枚腦片,2mm/片,立即置于2%TTC(紅四氮唑)溶液中,37℃水浴30min,4%多聚甲醛固定30min。顯微圖像分析系統(tǒng)采集每片腦切片上、下面圖像,分析每片腦切片上、下面腦梗死面積。根據(jù)梯形法則計算腦梗死體積。

3免疫組化染色

梗死后3d,將大鼠用10%水合氯醛麻醉,4%多聚甲醛心內(nèi)灌注后取腦,固定24h,組織脫水包埋。在梗死灶中心部位,相當于以前囟為中心,冠狀面+1~-1mm,每隔100μm,連續(xù)7μm切片5張,對NGF進行免疫組化染色。一抗為兔抗NGF(1∶200),二抗為生物素化羊抗兔IgG。顯色底物為DAB顯色劑。

4NGF測定

將染色后的腦組織切片取梗死周圍皮質(zhì),進行顯微圖像采集、分析(MetaMorph/DP10/BX41),記錄經(jīng)過處理軟件包量化后的灰度值。

5統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS11.0統(tǒng)計軟件做方差分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x珋±s)表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1NSS評分

3組神經(jīng)功能缺損減輕。tk組第3天NSS評分與其他2組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2動物模型經(jīng)切片、TTC(紅四氮唑)染色見圖1~圖2。

3腦梗死體積的比較

3組均有梗死灶形成,但TK組梗死灶體積(30.54%±3.47%)較NS組、空白對照組(38.43%±5.73%,39.67%±4.98%)明顯減輕(P<0.05)。

4缺血區(qū)NGF免疫組化結(jié)果

大腦中動脈閉塞后腦缺血區(qū)ngf增多,而注射TK后,NGF細胞明顯增多,TK組與其他2組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2及圖3~圖4。

討論

有學(xué)者提出,腦組織缺血性損傷早期,如果KKS受到激活而參與一系列的生理生化反應(yīng),可以加重腦組織損傷,原因為KKS增加通透性和腦水腫[6]。Zausinger等[7]研究顯示,在局灶性腦缺血前30min給予激肽B2受體拮抗劑(LF16-0687MS),可加快缺血性腦組織的功能恢復(fù)。另外,Xia等[8]提出,在腦組織缺血后8h,給予不同的治療,結(jié)果不同:注射人TK基因可使大鼠缺血性腦梗死的體積縮小;而LF16-0687MS能加重缺血性腦梗死的再灌注損傷。得出不同的結(jié)論與TK治療的時間有關(guān):TK在早期可使腦水腫加重,但后期卻能通過抑制細胞凋亡而起到神經(jīng)保護作用。倪耀輝等[9]研究顯示,在大鼠腦缺血再灌注后8h給予TK,對腦缺血有明顯的治療作用,可減輕炎性反應(yīng),同時還能降低梗死灶內(nèi)的細胞凋亡;明顯增加缺血區(qū)神經(jīng)細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和血管上皮細胞的增生。因此,推斷TK是通過促進血管、神經(jīng)組織再生以及抑制局灶缺血區(qū)的細胞凋亡、炎性反應(yīng)而發(fā)揮治療作用[10-11]。

本研究顯示,在大鼠大腦中動脈閉塞再灌注后8h注射TK,可改善大鼠的神經(jīng)功能缺損,并減少大鼠腦梗死體積,使腦缺血區(qū)NGF表達增多。結(jié)果表明,在腦缺血較晚期,TK有明顯的治療效果。另外,應(yīng)用TK治療能明顯增加缺血區(qū)的NGF表達,表明腦梗死時,TK有促進神經(jīng)細胞再生的作用。NGF能加速神經(jīng)元生長、分化及維持其功能,在腦內(nèi)能保護神經(jīng)元抵御很多類型的損傷。因此,得出結(jié)論,通過保護神經(jīng)元、促進軸突再生而減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。這為臨床應(yīng)用TK治療缺血性腦梗死提供了重要的理論依據(jù)。

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