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早教故事范文第1篇

一、“學前診斷”是“嘗試——診斷——建構”課堂教學模式中的預備鈴

何克抗曾經(jīng)說過：“傳統(tǒng)語文教學”的弊端在于把80％的工夫用在了不必教的地方。所以學前診斷對于實現(xiàn)高效課堂是非常必要的。古詩學習對于三年級學生而言，不陌生。但小學生思維以具體形象為主，古詩語言凝練，韻律和諧，這就使古詩教學成為語文教學的難點之一。要突破這一難點，針對古詩的文體特點，讓學生回憶鑒賞古詩的一般方法。即：1.知詩人，解詩題。2.抓字眼，明詩意。3.讀詩句，悟詩情。在學習《絕句》之前，學生已有一定學習古詩的基礎，將《絕句》的教學同釀酒一樣拓展，比較，賞析，形成積累的過程。教學《絕句》之前，我診斷出學生對于七言絕句一般的節(jié)奏的把握，只是讀出畫面和讀出情感需要課堂生成。學生對一二兩行的理解沒有問題，三四兩行需要診斷建構。我診斷出學生在嘗試評價這首古詩值得借鑒的地方，“動靜結合”可能領悟得出來，“顏色美”也比較淺顯，但“對仗”需要教師指點。

二、“自主嘗試”是“嘗試——診斷——建構”課堂教學模式中的敲門磚

人從“牙牙學語”與人交流，到離開父母的懷抱“蹣跚學步”，都有明顯的嘗試過程。在整節(jié)課中，學生自始至終都在用已有的知識進行嘗試。詩的意境是情趣與意象的融合，是詩人以獨有的眼光捕捉的生活圖景。小學課本所選的古詩語言精練，意境優(yōu)美。在《絕句》教學中采用嘗試教學手段，充分實現(xiàn)詩畫映照，引導學生感知意境、明理悟情、品評文字，能夠取得較好的教學效果。我引導學生嘗試感知意境：在閱讀全詩的過程中，指導學生通讀全詩，初步嘗試感知全詩。讀出《絕句》這首詩的韻味，也是從嘗試開始的，根據(jù)學生朗讀水平，師生一起診斷，怎樣才能讀得更好，再進行二次嘗試，直至讀出自己理解的最高水平。第一步，要求學生借助工具書自學字詞，進行旁批。然后由字到詞、由詞到句進行直譯，了解詩的大意。這時抓住時代背景：“安史之亂”終于被平息，憂國憂民的杜甫聽到這一消息，心境由沉悶變得開朗，詩人重返四川成都舊居，看到百姓又過上太平日子，看到草堂門前浣花溪邊生機勃勃的春景，心情十分愉悅，情不自禁地寫下這首膾炙人口的詩，因為沒有事先擬好題目，就用絕句這種詩的體裁名稱做了詩題。啟發(fā)學生想象，在這樣的歷史背景下，就有了愉悅的意境。學生沉浸在自己的遐想中，初步嘗試理解詩的意境。第二步，引導學生嘗試明理悟情：學生了解詩的大意后，要抓住色彩濃厚、形象鮮明的詩句，在細讀中嘗試明理悟情，體會詩的意蘊。如詩的第三行“窗含西嶺千秋雪”中的“千秋雪”，教師出示投影，展示覆蓋著終年不化積雪的岷山，讓學生通過觀察，口頭描述畫面，領悟“千秋雪”所描繪的畫面。第三步，引導學生借助預習初次嘗試說出古詩的大意，感受畫面，在不能表達通順暢處診斷，引領其理解古詩詩意的方法，再次嘗試感受畫面，使其連續(xù)發(fā)展。這首古詩前兩行“兩只黃鸝鳴翠柳，一行白鷺上青天”，詩意淺顯，完全可以放手讓學生自己去嘗試，但后兩行則需要診斷后再嘗試建構了。第四步，引導學生嘗試品評文字：古詩語言凝煉，錘煉文字的工夫，在文學的長河中達到了登峰造極的程度。教學中要深入淺出地引導學生分析作者對語言運用的表達方式。韓愈曾經(jīng)說過：“李杜文章在，光焰萬丈長。”嘗試著尋找這首詩好在哪里？對于“對仗”這種較深層的分析，教師應以指導為主，讓學生在讀的過程中嘗試品評、咀嚼，不要求學生掌握，重在提高語言素養(yǎng)，培養(yǎng)他們的分析能力。

三、“積累建構”是“嘗試——診斷——建構”課堂教學模式中的收獲箱

早教故事范文第2篇

古詩文的學習在小學階段有著如此重要的地位，但是我感到古詩文教學中經(jīng)常出現(xiàn)學生興致不高，學習被動效率低的情況。學生在這方面的積累少，缺乏基本的審美和想象能力，閱歷的欠缺都導致他們難以深切感受古詩文的魅力。課堂教學方法呆板，很多老師停留在傳統(tǒng)的表面講讀上，把古詩文進行分解。重字詞的解析，輕誦讀、感悟的教學方法也嚴重影響了學生學習古詩文的興趣。我感到無論是怎樣的學生與課堂，有一點很重要，那就是要營造古詩文教學的氛圍。氛圍是一種縈繞在學生周圍的文化的渲染與熏陶，氛圍是一種詩詞語境靜默無聲卻令人怦然心動的感覺與體驗，只有為學生創(chuàng)設了這樣一種氛圍，才等于將學生置身于一個學習感受的立體空間內(nèi)，那么學生對古詩文的學習就不單單是牽強的追隨老師生硬的講解，死板的去背誦詞義句意了。下面將我在古詩文教學中營造氛圍的幾點方法闡述如下。

一、巧用媒體，渲染氣氛

古詩文教學中，恰當?shù)厥褂枚嗝襟w，對優(yōu)化課堂教學有著事半功倍的作用。古詩文描寫的時代背景，畢竟與我們相隔了許多的年代，如果只是糾纏于文字，讓學生一遍遍地誦讀、感悟，學生一是會覺得枯燥，二來還是很難進入意境，加以體會。但如果能適時地出現(xiàn)與詩中意境相符的畫面，就可以一下子縮短學生的時空距離，讓學生有身臨其境之感，如我在教學《清平樂。村居》時，一共出現(xiàn)了六個畫面，就是這六個畫面，把學生帶進了這恬淡、閑適的村居生活和和諧、美滿的家庭氛圍，讓學生學得興致盎然，其樂融融。再看詩句，如同置身田野鄉(xiāng)間，讀詩學詩的同時也是心靈去旅游的過程。其次是音樂。幾乎每一堂古詩文教學的課堂上都應該用到音樂，如在教學《靜夜思》、《九月九日憶山東兄弟》等詩歌時，可用《思鄉(xiāng)曲》，如泣如訴的簫聲，最能體現(xiàn)詩人此刻對家鄉(xiāng)、對親人深切的思念之情。而在教學《從軍行》、《出塞》這些詩文時，《十面埋伏》的慷慨激越，更能激起朗誦者的激情。又如在教學朋友之間的情誼類的詩詞，那《高山流水》自然就是首選了。這就是古典音樂的力量，它能很自然地讓學生沉浸到古詩文描述的意境中。教師一般習慣于用音樂來配合學生或老師的朗誦，其實老師還可以在音樂聲中聲情并茂的為學生講解當時的背景與教師個人對詩詞個性的感悟理解。有了這樣的氛圍，學生自然是想讀、能悟、愿說。

二、詩意語言，再現(xiàn)意境

對古詩文而言，詩人往往將自己的感情、愿望寄托在所描寫的客觀事物之中，使自然事物好像也有了人的感情，從而創(chuàng)造出情景交融的藝術境界。事物的情感是隨著人的情感變化而變化的。葉圣陶曾說過：“詩歌的講授，重在陶冶性情，擴展想象，如果抓住精要之處，指導一二句話，也許就夠了，不一定要繁復冗長的講說。”古詩文的教學，一定要將學生領入詩文的意境，體驗詩人的感情，詩情畫意地教古詩，詩情畫意地學古文。因此，指導學生學習古詩文，再現(xiàn)意境是關鍵。

在教學時，為了幫助學生理解字詞詩句的意思，體會詩的意境，感知詩的表現(xiàn)手法，我采用了古詩配畫法進行教學。如教學楊萬里的《小池》，詩人著眼于小池，抓住泉眼、樹陰、小荷、蜻蜓等景物的特點，用清新活潑的語言 ，描繪了一幅靜謐、溫馨而富于生機的“泉池小荷”圖。我讓學生畫出詩中所描繪的景物。學生通過畫，仿佛融入到當時的情景之中，對詩人所表達的感情有了進一步的領會。運用古詩配畫教學法，有利于發(fā)展學生的形象思維，又能夠加深學生對詩意的理解，強化記憶，培養(yǎng)了審美的情趣，收到很好的效果。

教學中還可引導學生抓詩眼，把握詩中有情感色彩的、形象鮮明的、有深刻含義的詞語，反復推敲，進入詩的意境。如教學“春風又綠江南岸”的“綠”字。讓學生先理解“綠”的本義是“綠色”。再進一步追問：為什么不用吹、到、入、滿等詞呢？讓學生展開想象：從“綠”字你看到一幅怎樣的畫面？在此詩句中“綠”是“春天來到，萬物生機勃勃。”的意思。引領學生欣賞詩的意境。這樣學生就會從詩的本義、詩的意境去進行理解，真正領悟到古詩的意境美。

古詩文教學與我們平時的課堂教學，教師的語言風格應該大不相同的。用更詩意抒情的語言或華麗壯美的詞匯來描繪美景或闡述詩意，這可以給整堂課的教學墊定一個基調(diào)。讓我們來欣賞這樣幾段話：同學們，你們看哪，（老師邊播放日落美景邊描述）黃昏時分，太陽慢慢地從西邊落下去了，晚霞染紅了整個天空，遠山、近水、小船、涼亭，全都被籠罩在夕陽的余暉中。水面上波光粼粼，這讓我們很自然地想起來這樣的詩句：一道殘陽鋪水中，半江瑟瑟半江紅。師出示了幾張邊塞的圖片，同時合著凄涼的音樂介紹：遠古的邊塞，人煙稀少，這里有荒涼的大漠，這里有冷峻的雪山，這里有殘破的孤城，更有四起的硝煙和血腥的屠殺……如今，我們還能看到遠古邊塞留下來的殘垣斷壁，土墻碎瓦。許多詩人就以邊塞風光或邊塞戰(zhàn)事為題材，創(chuàng)作了許多邊塞詩。

詩意的教學語言等于為學生架設了一座走進詩詞意境的橋梁，當然這跟教師的個人素質(zhì)在很大的關系，這就要求作為一名語文教師的我們，心中滿滿的不能是死水，而是不斷與時俱進的源頭活水，多讀書，多思考，才能在古詩詞的教學中為學生拋磚引玉，運用我們富有個人魅力的語言，將學生帶入有花香有鳥鳴有刀光有劍影的古詩詞世界中來。

三、授之于法，輕松學習。

在教學古詩文時，交給學生學習的方法至關重要，這為今后學生的自學提高打下扎實的基礎。如不久前聽一位老師執(zhí)教的《學弈》，他將文言文的學法貫穿于對文言文重點語句和內(nèi)容的理解之中，以讀為本，在讀中悟，在悟中讀。他將學習古文的方法歸納為四點，分點呈現(xiàn)在每個教學環(huán)節(jié)中，最后總結時全部點明，讓學生在不由自主的學習中學到方法，學會運用。同時，他能很好的引導學生學以致用。如在教學“弈秋，通國之善弈者也。”這個重點句時，他能用這個句型造句，“某某，通班之善思者也。某某，通班之善說者也。”等等。學生很快就理解句子并學會運用。整堂課，他針對文言文的特點，引導學生反復朗讀，從中帶入動作，引領學生進入古文學習的氛圍。

授之以魚不如授之以漁。學生從教師處獲得學習古詩文的方法，學以致用，今后無論學習哪首古詩詞，哪篇古文，都能如魚得水，從而進入“教是為了不需要教”的絕妙境界，真正做到自學古詩文，樂在其中。

四、適度拓展，加深修養(yǎng)。

早教故事范文第3篇

關鍵詞：護理管理學；彼得原理；比馬龍效應；安泰效應；貝爾效應；布里丹毛驢效應；暗示效應

【中圖分類號】G642

《護理管理學》是天津醫(yī)科大學護理學院護理專業(yè)本科生的必修課程，本課程介紹管理學的發(fā)展和基本原理；管理學的計劃、組織、人員管理、領導及控制五個基本職能，以及在護理業(yè)務技術和質(zhì)量管理實踐中的應用。以提高學生護理管理、教學、科研等方面的思維與技巧。課程內(nèi)容以理論為主，與其他醫(yī)學課程的病例教學相比，顯得較為抽象、枯燥、乏味，學生興趣不強。筆者在教學過程中發(fā)現(xiàn)，將心理學某些原理應用于護理管理學的教學中，既能夠活躍課堂氣氛，增加學生學習的興趣，又可以幫助學生理解抽象的理論知識，將其內(nèi)化并更好地運用。現(xiàn)列舉護理管理中的領導幾個實例加以論述。

1領導者的影響力

領導者重要的任務是“影響”個體或群體的行為。影響力來源主要有兩個方面：一是來自職位的權力。二是來自個人的權力。

2管理者的領導藝術

一名成功的管理者，需要既能實現(xiàn)組織目標又能引導人群，既要有良好的工作業(yè)績，又要展現(xiàn)正確的形象，還要運用好權力等。樹立管理者威信，完善個人形象越來越成為重要的領導藝術之一。

3管理決策

隨著客觀環(huán)境的發(fā)展變化，決策在管理中的作用日益突出，內(nèi)容日益豐富。決策理論成為西方管理理論中的一個重要組成部分。決策理論認為，管理工作的核心問題就是決策，決策貫穿于領導活動的全過程[1]。

4心理學原理

4.1安泰效應

安泰是古希臘神話中的大力神，他力大無窮，無往不勝。因為他只要靠在大地上，就能從大地母親那里汲取無窮的力量。他的對手發(fā)現(xiàn)了這個秘密，便誘使他離開地面，在空中殺死了他。安泰效應告訴我們領導者要學會依靠大家、依靠集體。

4.2貝爾效應

英國學者貝爾天賦極高。有人估計過他畢業(yè)后若研究晶體和生物化學，定會贏得多次諾貝爾獎。但他卻心甘情愿地走了另一條道路把一個個開拓性的課題提出來，指引別人登上了科學高峰，此舉被稱為貝爾效應[2]。

貝爾效應提示領導者具有伯樂精神、人梯精神、綠地精神，在人才培養(yǎng)中慧眼識才，放手用才，敢于提拔任用能力比自己強的人，積極為有才干的下屬創(chuàng)造脫穎而出的機會。

4.3布里丹毛驢效應

布里丹是大學教授，養(yǎng)了一頭小毛驢，他每天要向附近的農(nóng)民買一堆草料來喂。這天，送草的農(nóng)民出于對哲學家的景仰，額外多送了一堆草料放在旁邊。毛驢站在兩堆數(shù)量、質(zhì)量和與它的距離完全相等的干草之間極為為難。它雖然享有充分的選擇自由，但由于兩堆干草價值相等，客觀上無法分辨優(yōu)劣，于是它左看看，右瞅瞅，始終無法分清究竟選擇哪一堆好。于是，這頭可憐的毛驢就這樣站在原地，考慮數(shù)量、質(zhì)量、顏色、新鮮度，猶猶豫豫，來來回回，在無所適從中活活地餓死了。那頭毛驢最終之所以餓死，導致它們最后悲劇的原因就在于它們左右都不想放棄，不懂得如何決策。這種在決策過程中猶豫不定、遲疑不決的現(xiàn)象稱之為“布里丹毛驢效應”。

護理管理者在工作中經(jīng)常面臨著種種抉擇，人們都希望得到最佳的結果，常常在抉擇之前反復權衡利弊，再三仔細斟酌，甚至猶豫不決，舉棋不定。但是，在很多情況下，機會稍縱即逝，并沒有留下足夠的時間讓我們?nèi)シ磸退伎迹炊笪覀儺敊C立斷，迅速決策。如果猶豫不決，就會兩手空空，一無所獲。當面臨兩難的困境時，護理管理者可以應用的解決辦法包括：

4.3.1穩(wěn)健決策：有一個流傳很廣的笑話說：齊國有個女孩，兩個人同時來求婚。東家的兒子很丑但是家財萬貫，西家的兒子相貌英俊但是很窮。那女孩的父母不能決定選誰，就去問他們的女兒想嫁給哪個。女孩不好意思說話，母親就說，你想嫁哪個就露出哪邊的胳臂。結果女孩露出兩個胳臂。母親奇怪地問她原因，女孩說：“我想在東家吃飯，西家住。”在東家吃飯在西家住，看上去是一個笑話，但卻不失為了一種穩(wěn)健的決策取向。在很多情況下，當一種趨勢出現(xiàn)時，有些人一個勁地陷入哪個好哪個壞的爭論之中，事實上沒有這個必要，只要沒有明確的二者擇一的必要，就不必太早決策。

4.3.2獨立思考：不能獨立思考，總是人云亦云，缺乏主見的人，是不可能做出正確決策的。如果不能有效運用自己的獨立思考能力，隨時隨地因為別人的觀點而否定自己的計劃，將會使自己的決策很容易出現(xiàn)失誤。從前，有兄弟兩個看見天空中一只大雁在飛，哥哥準備把它射下來。說：“等我們射下來就煮著吃，一定會很香的！”這時，他的弟弟抓住他的胳膊爭執(zhí)起來：“鵝煮著才會好吃，大雁要烤著才好吃，你真不懂吃。”哥哥已經(jīng)把弓舉起來，聽到這里又把弓放下，為怎么吃這只大雁而猶豫起來。就在這時，有一位老農(nóng)從旁邊經(jīng)過，于是他們就向老農(nóng)請教。老農(nóng)聽了以后笑了笑說：“你們把雁分開，煮一半烤一半，自己一嘗不就知道哪一種方法更好吃了？”哥哥大喜，拿起弓箭再回頭要射大雁時，大雁早已無影無蹤了，連一根雁毛都沒有留下。

4.3.3決策紀律：利與弊往往是事情的一體兩面，很難分割。有的人明明事先已經(jīng)編制了能有效抵御風險的決策紀律，但是一旦現(xiàn)實中的風險牽涉到自己的切身利益時，往往就不容易下決心執(zhí)行了。很多股民在處于有利狀態(tài)時會因為賺多賺少的問題而猶豫不決，在處于不利狀態(tài)時，雖然有事先制定好的止損計劃和止損標準，可常常因為最終使自己被套牢。

4.3.4目標合理：不要總是試圖獲取最多利益。過高的目標不僅沒有起到指示方向的作用，反而由于目標定得過高，帶來一定心理壓力，束縛決策水平的正常發(fā)揮。事實上多數(shù)環(huán)境中，如果沒有良好的決策水平做支撐，一味地追求最高利益，勢必將處處碰壁。而且，很多人不了解盡快停損的重要性，當情況開始惡化時，依然緊抱著飄渺的勾想，無法客觀分析狀況，以賭徒的心態(tài)，盲目堅守以致持續(xù)深陷，直至無法挽回的地步。這時平衡的心態(tài)往往更重要。

4.3.5審時度勢：在不利環(huán)境中不能逆勢而動。當不利環(huán)境造成損失時，很多人急于彌補損失。但是，環(huán)境的變化是不以人的意志為轉移的。當環(huán)境變壞，機會稀少的時候，如果強行采取冒險和激進的決策，或頻繁的增加操作次數(shù)，只會白白增加投資失誤的概率。美國通用電氣公司總裁杰克?韋爾奇把決策能力看成是“面對困難處境勇于作出果斷決定的能力”，看成是“始終如一執(zhí)行的能力。”因此，決策具有復合性，是一種合力，我們必須從自己的洞察力、分析能力、直覺能力、創(chuàng)新能力、行動能力和意志力等方面進行不斷地訓練，在不斷地失敗與成功之間，我們才能夠不斷地擺脫猶豫不決，進行相對理性的選擇，才不會成為布里丹的驢子！

布里丹毛驢效應提示管理者在進行護理管理計劃時要注意：把眼前的機會抓住了，把手頭的事情辦好了，就意味著勝利，意味著成功。與其在那里好高騖遠設計，絞盡腦汁地編織出一個又一個方案，不如面對現(xiàn)實，抓住機會，竭盡全力，把眼前最重要的事情辦好。

4.4暗示效應

暗示在本質(zhì)上，是人的情感和觀念，會不同程度地受到別人下意識的影響。人們會不自覺地接受自己喜歡、欽佩、信任和崇拜的人的影響和暗示。而這種暗示，正是讓你夢想成真的基石之一。

語言暗示――積極的語言能使人產(chǎn)生積極的情緒，改變消極的心態(tài)，因而領導者可以有意識地用“你真聰明”“你一定行”等語言為下屬打氣，還可以讓下屬之間相互鼓勵

動作暗示――在下屬氣餒的時候拍拍肩膀。

表情暗示――當下屬在演講或操作時，領導如果是微笑地注視著他們，那么對下屬來說就是一種莫大的鼓勵，他們能看到領導眼里的肯定和贊許。

自我暗示――領導還要教育下屬學會自我暗示，有的護士每當遇上復雜病人就會有“慘了！慘了！”“好難啊！”等自我暗示，在工作上維持著焦慮狀態(tài)，從而干擾正常水平發(fā)揮。這種思維習慣一旦形成就會嚴重阻礙操作的效果。所以領導要讓護士學會積極的自我暗示，想著自己一定能一定做的到[3]。

5小結

《護理管理學》是國內(nèi)很多本科護理學專業(yè)的必修課程，但是這種以抽象理論為主的課程不論是教師的教授還是學生的學習都存在著一定的困難。筆者在《護理管理學》的教學過程中添加了心理學理論以及一些心理學方面的啟示性故事，讓學生進行分組討論和角色扮演，讓學生運用理論知識，自己編排腳本，并在課上展示，使學生在學習過程中興趣倍增，課堂氣氛明顯比以往活躍，學生參與性也更強，在此過程中學生對理論知識的理解更強，更加深入，解決問題的能力得到了鍛煉，讓理論授課增加了實踐性，收到了良好的效果。

參考文獻

[1]李繼平.護理管理學[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：82-143.

早教故事范文第4篇

(1)由于人為或自然原因致使路面出現(xiàn)坑洞或隆起部分，導致機動車輛翻車、撞車，造成人員傷亡或者財產(chǎn)損失。這里的人為原因包括由于修路造成路面破裂或埋設管道、線路等其他原因將路面挖裂，事后忘記填補等。自然原因包括因熱賬冷縮導致路面破裂、突起或路面由于使用過久而導致破落。

(2)路面存在異物(如石子、泥土等)，機動車碾過時，使其飛起砸傷行人，砸壞物品。

【法律依據(jù)】

早教故事范文第5篇

[關鍵字]絞股藍總皂苷；長循環(huán)脂質(zhì)體；β-谷甾醇；聚乙二醇

脂質(zhì)體由于具有緩釋、增效、減毒、靶向等優(yōu)點，是中藥傳遞系統(tǒng)中最受關注的熱點[1-2]。近年來發(fā)展的長循環(huán)脂質(zhì)體或隱形脂質(zhì)體（long-circulating liposomes， stealth liposomes）[3]是通過將聚乙二醇-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE） 鑲嵌在脂質(zhì)體雙層膜之間，PEG 的長鏈在脂質(zhì)體表面形成空間位阻和親水保護層，能阻止吞噬細胞對脂質(zhì)體的的識別和攝取而極大地延長脂質(zhì)體的血循環(huán)時間，便于藥物進入病變組織，提高治療指數(shù)和療效[4-5]，但由于磷脂價格較高，PEG修飾后價格更加昂貴，且DSPE，PEG均為大分子，與硅膠有很強的吸附性，合成后分離純化相當困難，得率極低，大大限制了長循環(huán)脂質(zhì)體在制劑領域中的應用[6]。

本課題組前期已論證了以不引發(fā)心血管疾病的植物甾醇替代膽固醇來穩(wěn)定脂質(zhì)體、構建脂質(zhì)體的可行性[7]，又論證了采用新型磷脂――鞘磷脂制備高穩(wěn)定性的脂質(zhì)體的可行性[8]。在本課題中，筆者避開用PEG對磷脂修飾制備長循環(huán)脂質(zhì)體的常規(guī)思路，采用PEG對價格相對低廉的小分子甾醇進行修飾，得到聚乙二醇-β-谷甾醇（PEG-Sito），然后以PEG-Sito為長循環(huán)材料和近年來被發(fā)現(xiàn)具有顯著的抑制腫瘤作用的絞股藍總皂苷（gypenosides）為模型藥，對用PEG-Sito制備絞股藍總皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體的可行性進行了探討，為中藥長循環(huán)脂質(zhì)體的開發(fā)提供一種新的思路，具有較大的理論及應用價值。

1 材料

Model RE-52A 型旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生物儀器公司）；AVYⅢ-500 MHz核磁共振儀（美國bruker公司）；360型傅立葉變換紅外光譜儀（Wartars公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；HZQ-X280恒溫振蕩培養(yǎng)箱（太倉市華美生化儀器廠）；BS210型電子天平；WFJ2000可見分光光度計；KBS-150型數(shù)控超聲波細胞粉碎機（昆山市超聲儀器有限公司）；SCZL-A型數(shù)字智能控溫磁力攪拌器（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-2（國華電器有限公司）；原子力顯微鏡AFM（Veeco公司）；LGJ-10冷凍干燥儀（北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司）。

絞股藍總皂苷（陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司，批號20120119）；魚精蛋白（Sigma公司，批號P4672）；絞股藍皂苷對照品（阿拉丁，批號D100246）；香草醛（上海晶純實業(yè)有限公司，批號v100115）；鞘磷脂（Sigma公司，批號E1028）；β-谷甾醇（杭州大陽化工有限公司，質(zhì)量分數(shù)97%）；丁二酸酐（國家集團化學試劑有限公司）；4-二甲氨基吡啶（DMAP）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）、磷鉬酸均購于阿拉丁，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 PEG-Sito的合成[9]

2.1.1 PEG-Sito的合成 路線具體合成路線見圖1。

2.1.2 β-谷甾醇衍生物的制備[10] 將β-谷甾醇（Sito）（2.50 g，6.03 mmol），丁二酸酐（3.25 g，32.48 mmol），DMAP（0.40 g，8.19 mmol）溶于50 mL二氯甲烷中，在45 ℃下劇烈攪拌回流48 h。二氯甲烷溶液用1 mol?L-1（50 mL×3）鹽酸溶液洗滌，Na2SO4干燥在旋轉蒸發(fā)儀上旋干，得白色固體（suc-Sito）2.80 g，收率90.3%。β-谷甾醇衍生物（suc-Sito）經(jīng)薄層色譜（TLC） 鑒定，Rf=0.7（氯仿-甲醇12∶1，5%磷鉬酸顯色） ；1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.37（d，β-谷甾醇C6-H，1H），4.63（q，β-谷甾醇C3-H，1H），2.68（t，丁二酸CH2，2H），2.61（t，丁二酸CH2，2H）， 2.31（d，β-谷甾醇C4-H，2H）。

2.1.3 PEG-Sito的制備[11] 將suc-Sito（2.2 g，4.27 mmol），PEG 2000（12.02 g，6.01 mmol），DMAP（0.49 g， 4.01 mmol），EDC（0.85 g，4.43 mmol）溶于50 mL二氯甲烷中，常溫下攪拌48 h。二氯甲烷溶液用1 mol?L-1（100 mL×3）鹽酸溶液洗滌，Na2SO4干燥，過濾，旋干。粗品經(jīng)硅膠（300～400目）快速柱色譜，二氯甲烷-甲醇（60∶1）洗脫，減壓濃縮收集液，得黃色固體3.06 g，收率28.7%。PEG-Sito（3）經(jīng)薄層色譜（TLC）鑒定，Rf=0.4（二氯甲烷-甲醇30∶1，5%磷鉬酸、碘蒸氣顯色）；1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ： 5.37（d，C6-H，1H），4. 63（q，C3-H，1H），3.65（m，聚乙二醇-O-CH2 CH2-O-，約190H），2.66（m，丁二酸CH2-CH2，4H），2.31（d，β-谷甾醇C4-H，2H）。

2.2 乙醇注入法制備絞股藍總皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體

稱取絞股藍總皂苷12 mg，鞘磷脂60 mg，PEG-Sito 60 mg于100 mL燒杯中，加入乙醇20 mL使之完全溶解。取pH為7.0的磷酸鹽緩沖液20 mL，預熱到45 ℃，攪拌下用針頭勻速注入燒杯中，恒溫攪拌2 h以除去乙醇，冰浴條件下探頭超聲10 min（超聲時間2 s，間隔時間2 s，功率100 W），過0.45 μm微孔濾膜即得絞股藍總皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體[12]。

2.3 絞股藍總皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體測定方法的建立

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的絞股藍皂苷對照品50 mg加入蒸餾水定容于100 mL量瓶中作為貯備液。取貯備液適量，加水稀釋成質(zhì)量濃度為0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 g?L-1的對照品溶液。

2.3.2 測定波長的確定 絞股藍皂苷對照品和空白脂質(zhì)體用5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）樣品顯色，在400～1 100 nm處進行光譜掃描，結果顯示對照品最大吸收波長為555 nm，且該處空白脂質(zhì)體無干擾，故選擇測定波長為555 nm。

2.3.3 線性關系考察 參照《中華人民共和國衛(wèi)生部頒標準》絞股藍總苷進行。取6支具塞試管，精密量取2.2.1項下不同濃度對照品溶液1 mL，分別置15 mL具塞試管中，精密加入新鮮配制的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL，搖勻，密塞，置60 ℃水浴中加熱15 min，取出，立即放入冰水中冷卻2 min，精密加入冰醋酸10 mL，搖勻，以試劑作空白，照分光光度法項下（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA）試驗，于（555±5） nm波長處測定吸收度。以吸光度（A）為縱坐標，質(zhì)量濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程A=0.713 9C+0.074 2，r=0.999 3，線性范圍0.050 3～0.503 g?L-1。

2.3.4 精密度試驗 精密吸取同一份對照品溶液1.0 mL，置15 mL具塞試管中，按2.3.3項下自“精密加入新鮮配制的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，在同一條件下連續(xù)測定吸光度5次，RSD 1.6%，表明儀器精密度良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液1 mL，置15 mL具塞試管中，分別在0，5，10，15，20 min按2.3.3項下自“精密加入新鮮配制的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，測定吸光度，RSD 2.1%，說明供試品在20 min內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.3.6 重復性試驗 精密量取同一份樣品5份，每份1 mL，按2.3.3項下自“精密加入新鮮配制的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，在同一條件下分別測定吸光度，RSD 2.6%，表明重復性良好。

2.3.7 加樣回收試驗 精密稱取空白脂質(zhì)體凍干粉10 mg，精密稱量，置10 mL量瓶中，分別精密加入2.5 g?L-1的絞股藍皂苷對照品溶液1.0，3.0，5.0 mL，加水稀釋至刻度。精密吸取2.0 mL置于離心管中，加0.5 mL魚精蛋白（10 g?L-1），靜置3 min，加入生理鹽水3.0 mL，在室溫條件下3 000 r?min-1離心30 min。精密量取上清液1.0 mL，按2.3.3項下自“精密加入新鮮配制的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，在同一條件下分別測定吸光度，回收率為97.15%，RSD 2.1%。

2.3.8 絞股藍總皂苷脂質(zhì)體包封率的測定 吸取脂質(zhì)體2.0 mL于10 mL錐形離心管中，添加魚精蛋白（10 g?L-1）0.5 mL，攪勻，靜置3 min，加入生理鹽水3.0 mL，在室溫條件下3 000 r?min-1離心30 min。取上清液1 mL，測定其皂苷量，即游離藥物量（W游）。沉淀以10%曲拉通-X100（Triton-X100）3.0 mL溶解，并補充生理鹽水至5.0 mL。取溶液1 mL，測定其皂苷量，即包封藥物量（W包）。包封率= W包/（ W包+ W游）×100%。該新型長循環(huán)脂質(zhì)體的包封率為74.3%。

2.4 脂質(zhì)體粒度分布及Zeta電位測定

采用動態(tài)光散射粒徑儀檢測平均粒徑和Zeta 電位。激光束波長633 nm，入射與散射光束夾角173°，溫度25 ℃。取脂質(zhì)體溶液100 μL用水稀釋至10 mL，搖勻平衡3 min后測定，結果見圖2，3。絞股藍總皂苷脂質(zhì)體平均粒徑為288.1 nm，多分散系數(shù)（PDI）為0.218，說明該脂質(zhì)體粒徑分布較均一。平均電位為-20.25 mV，表明該脂質(zhì)體穩(wěn)定性較好。

3 討論

采用PEG對β-谷甾醇進行修飾，修飾后的PEG-Sito作為穩(wěn)定劑而加入到脂質(zhì)體中，一方面β-谷甾醇不引發(fā)心血管疾病，親脂性的β-谷甾醇還可以起到穩(wěn)定脂質(zhì)體膜的作用。同時柔性分子PEG的存在還能阻止吞噬細胞對脂質(zhì)體的的識別和攝取，大大延長脂質(zhì)體的血循環(huán)時間。本課題探討了用PEG修飾后的β-谷甾醇制備長循環(huán)脂質(zhì)體的可行性。研究表明PEG修飾后的β-谷甾醇能與鞘磷脂形成脂質(zhì)體。該新型脂質(zhì)體改變了長循環(huán)脂質(zhì)體對PEG修飾的磷脂材料的依賴，大幅降低了制備長循環(huán)脂質(zhì)體的成本，是本文的獨特之處。

甾醇在乙醇中微溶，是制約乙醇注入法在脂質(zhì)體工業(yè)化領域中應用的瓶頸之一。本課題在對β-谷甾醇進行修飾時，由于親水性材料PEG的引入，大大改善了β-谷甾醇在乙醇中的溶解度，工業(yè)上大規(guī)模采用乙醇注入法制備該長循環(huán)脂質(zhì)體成為可能，也是本文的創(chuàng)新之處。

對比課題組以前對絞股藍總皂苷脂質(zhì)體的研究結果，該新型長循環(huán)脂質(zhì)體的包封率較普通脂質(zhì)體的包封率由（79.1±3.4）%變?yōu)椋?4.3±2.6）%，方差分析結果表明包封率無顯著性差異，提示該長循環(huán)脂質(zhì)體的內(nèi)部結構與普通脂質(zhì)體無異[13]。粒徑則由普通脂質(zhì)體的202.6 nm，增大為288.1 nm，這可能是由于PEG分子鏈在水中柔性舒展開來造成的粒徑增大的緣故[14]。一般情況下，小于400 nm的納米粒子在血液中具有被動靶向到肝、脾或腫瘤組織的性質(zhì)[15]，本課題組制備出的絞股藍皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑不到300 nm，因此該制劑具有被動靶向到肝和腫瘤的特性，可用于肝炎、脂肪肝和肝癌疾病的治療。

研究表明Zeta電位能從一定程度上反映納米分散體系的穩(wěn)定性，Zeta 電位絕對值越高（>15 mV），粒子間的靜電斥力越大，有高的穩(wěn)定性[16-18]。該絞股藍總皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體Zeta電位為-20.25 mV（電位絕對值>15 mV），而普通脂質(zhì)體Zeta電位為-28.66 mV，表明長循環(huán)脂質(zhì)體與普通脂質(zhì)體一樣具有較好的穩(wěn)定性，但長循環(huán)脂質(zhì)體的Zeta電位絕對值下降了8.41 mV，這可能是由于脂質(zhì)體外層的PEG的電荷屏障效應造成的[19]。

AFM電子顯微鏡常用于各種脂質(zhì)體的形貌研究[20]。本課題應用AFM對該新型絞股藍總皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體進行了形貌觀察，電鏡下的長循環(huán)脂質(zhì)體外形圓整、粒徑均一，證明用PEG修飾后的β-谷甾醇制備長循環(huán)脂質(zhì)體是切實可行的。

本課題研究了用PEG修飾β-谷甾醇的方法，探討了用PEG-Sito與鞘磷脂制備絞股藍皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體的可行性，并對該新型脂質(zhì)體進行了表征。該長循環(huán)脂質(zhì)體不僅不含膽固醇，而且針對小分子β-谷甾醇進行PEG修飾[21]，合成中未采用價格昂貴的大分子磷脂為原料，分離純化過程大大減化，大幅降低了長循環(huán)脂質(zhì)體的材料成本，具有很好的市場前景。關于該甾醇修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體更深層次的研究，如該新型長循環(huán)脂質(zhì)體在體內(nèi)有無加速血液清除現(xiàn)象（accelerated blood clearance， ABC） [22]、與普通磷脂修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體在體內(nèi)各組織的分布與滯留特性等問題，正處于進一步研究中。

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Preparation of novel gypenosides long-circulating liposomes consisted by

sphingomyelin and β-sitosterol modified by PEG

YU Fan*， YANG Jing-ming， LI Jin-juan

（College of Pharmacy， Yancheng Teachers University， Yancheng 224051， China）

[Abstract] Objective： To explore the feasibility of preparing novel gypenosides long-circulating liposomes with PEG grafted on β-sitosterol （PEG-Sito）. Method： Succinicanhydride was adopted to connect β-sitosterol and PEG 2000. Sphingomyelin and PEG-Sito was used as material to prepare gypenosides long-circulating liposomes by using ethanol injection method. Encapsulation efficiency was determined by using protamine precipitation method. 1H-NMR was used to verify the synthesis of PEG-Sito， the novel gypenosides long-circulating liposomes were characterized by particle size， zeta potential and atomic force microscope. Result： The synthesis of PEG-Sito was verified by 1H-NMR. Encapsulation efficiency of long-circulating liposomes prepared by ethanol injection method was 74.3%， particle size was 288.1 nm，zeta potential was -20.25 mV， the morphology were round observed by AFM. Conclusion： The novel gypenosides long-circulating liposomes prepared with PEG-Sito was feasible， it had a high encapsulation efficiency and good morphology.