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[關(guān)鍵詞] 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 視網(wǎng)膜細(xì)胞 大鼠
成體干細(xì)胞中的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有多向分化的潛能,雖然其來源于中胚層,卻可以跨胚層分化為外胚層來源的組織細(xì)胞,而視網(wǎng)膜則來源于胚胎期神經(jīng)外胚層。MSC表達(dá)許多生長因子和細(xì)胞因子受體以及細(xì)胞與細(xì)胞黏附作用的受體,提示MSC的功能受自分泌和旁分泌循環(huán)的調(diào)控。這成為不同方法誘導(dǎo)MSCs定向分化的理論基礎(chǔ)。組織或細(xì)胞在受到損傷后會進(jìn)行自身修復(fù),視網(wǎng)膜是接受光能,形成視覺的重要組織結(jié)構(gòu),如果光照強(qiáng)度或光照時間超過了視網(wǎng)膜的承受力,將會造成視網(wǎng)膜光損傷。本研究旨在用光損傷視網(wǎng)膜片的培養(yǎng)上清液體外誘導(dǎo)MSCs,看其損傷時分泌的細(xì)胞因子和分化所需蛋白是否能誘導(dǎo)MSCs分化為視網(wǎng)膜光感受器樣細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞。探索體外構(gòu)建MSCs分化成視網(wǎng)膜細(xì)胞所需微環(huán)境的理論可能性。
1材料與方法
1.1 實驗動物
健康無眼病成年Sprague-Dawley(SD)大鼠,雌雄不限,體重120~150g(吳氏實驗動物中心)。
1.2 大鼠視網(wǎng)膜片的取材
10%水合氯醛按0.3mL/100g腹腔注射麻醉,無菌狀態(tài)下取出眼球。把眼球用10%FBS的LG-DMEM洗滌3次,去除球周筋膜組織,清洗干凈后移入另一盛有10% FBS的LG-DMEM培養(yǎng)皿中,在解剖顯微鏡下,在角鞏膜緣后1mm處剪開,用顯微剪取出角膜、晶狀體、玻璃體,留有外層覆蓋鞏膜的視網(wǎng)膜杯。把視網(wǎng)膜杯浸入培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液里,由杯緣向杯底,用顯微鑷鈍性分離視網(wǎng)膜和鞏膜,在視神經(jīng)處剪斷,徹底分離視網(wǎng)膜色素上皮層與視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層。
1.3 大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層常規(guī)石蠟切片HE染色
將大鼠視網(wǎng)膜片(只包含神經(jīng)上皮層)常溫浸泡甲醛24h以固定,常規(guī)脫水、透明、包埋、切片,常規(guī)脫蠟,行蘇木素-伊紅(HE)染色,封片。用數(shù)字?jǐn)z像系統(tǒng)觀察并采集照片。
1.4 視網(wǎng)膜片光損傷和條件培養(yǎng)液的制備
把分離好的4只眼球的視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層移入另一盛有8mlNeurobasal+B27的小培養(yǎng)皿中(直徑60mm)。用眼科顯微剪把視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層剪成1mm×1mm×1mm大小。在超凈臺內(nèi),50W,12V的鹵素?zé)糇鳛楣庠矗扇≈甭涫秸丈渖鲜龅男∨囵B(yǎng)皿,用TES-1330A照度計測定光照強(qiáng)度,調(diào)整光源與培養(yǎng)皿之間的距離(3.5cm),使被照細(xì)胞同一水平的光照強(qiáng)度為(1950 ±200) Lux ,光照時該水平溫度變化在0.5℃之內(nèi),持續(xù)光照45min,光照后將培養(yǎng)皿放入37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)1小時15min。用去針頭的針筒吸出小培養(yǎng)皿中的液體,離心后上清液用0.22um濾器過濾,以2:3的比例與10%FBS-LGDMEM混合,并吹打均勻,制成條件培養(yǎng)液Ⅰ。條件培養(yǎng)液Ⅱ制備方法同條件培養(yǎng)液Ⅰ,只是視網(wǎng)膜片未經(jīng)過光損傷處理,盛有Neurobasal+B27和視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層的小培養(yǎng)皿直接放入37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)2小時。條件培養(yǎng)液Ⅲ為Neurobasal+B27和10%FBS-LGDMEM以2:3的比例混合,無視網(wǎng)膜片以及光損傷處理。三種條件培養(yǎng)液均放于-20℃保存。
1.5 視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層光損傷后電鏡觀察
取材,3%戊二醛―1.5%多聚甲醛前固定,1%鋨酸―1.5%亞鐵氰化鉀后固定,酒精―丙酮脫水,環(huán)氧樹脂618包埋劑包埋;超薄切片,醋酸鈾、檸檬酸鉛染色,日立Hu-12A型(飛利浦208型)透射電鏡觀察、攝影。
1.6 大鼠MSC的分離和培養(yǎng)
取SD大鼠,麻醉后,無菌條件下取出雙側(cè)股骨和脛骨,剔除周圍肌肉組織。在超凈臺內(nèi),用PBS沖干凈,轉(zhuǎn)移到盛有20%FBS-LGDMEM的培養(yǎng)皿中,去除長骨2端骨骺,暴露骨髓腔。用培養(yǎng)液沖出骨髓腔內(nèi)的骨髓液,吹打。用200目篩網(wǎng)過濾后置于離心管中,1000rpm,10min,棄上清,用10%FBS-LGDMEM培養(yǎng)液重懸后以10×108/mL接種于塑料培養(yǎng)瓶中。37℃、5%二氧化碳培養(yǎng),24h換液,以后每3d換液一次,除去非貼壁細(xì)胞,12~15d后MSC達(dá)90%瓶底面積時傳代,P1后細(xì)胞融合至80%進(jìn)行1:2傳代。
1.7 MSC的鑒定
當(dāng)?shù)?代的BMSCs融合達(dá)90%,經(jīng)0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化、離心后用PBS制成2×106/mL的細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分裝至4只樣品管中,分別加入熒光標(biāo)記的小鼠抗大鼠單抗CD34-FITC+小鼠抗大鼠單抗CD90-PE,小鼠抗大鼠單抗CD34-FITC+小鼠抗大鼠單抗CD44-PE及其對應(yīng)的同型對照各10μL,混勻,37℃下避光反應(yīng)20min。每管加入1mLPBS混勻,離心2000rpm,10min以洗去未標(biāo)記上的抗體。棄上清液,每管再加入1mLPBS重新混懸細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原CD34、CD44和CD90的表達(dá)。對細(xì)胞純度進(jìn)行鑒定。
1.8 MSC體外誘導(dǎo)成視網(wǎng)膜細(xì)胞
取第3代BMSCs細(xì)胞消化、離心后用10%FBS-LGDMEM重懸后以200ul/孔接種于6孔板,24h待BMSC貼壁后,棄培養(yǎng)液,將細(xì)胞分為3組:第1組換用條件培養(yǎng)液Ⅰ,第2組換用條件培養(yǎng)液Ⅱ,第三組換用條件培養(yǎng)液Ⅲ,3個組均在在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育。每天觀察記錄細(xì)胞生長分化情況,每2天換一次條件培養(yǎng)液,培養(yǎng)至第7~8天時停止。
1.9 誘導(dǎo)的BMSCs細(xì)胞免疫化學(xué)染色
采用Envision二步法,分別將3組誘導(dǎo)的MSC玻片取出,均與神經(jīng)元特異性標(biāo)志小鼠抗大鼠醇化酶(NSE) (稀釋度1:50)(美國Fisher Scientific公司)、星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志小鼠抗大鼠單克隆抗體神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP) (稀釋度1:50)(美國Fisher Scientific公司)、光感受器特異性標(biāo)志小鼠抗大鼠單克隆抗體視紫質(zhì)(Rhodopsin) (稀釋度1:50)(美國Fisher Scientific公司)和二抗(生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體)作用,二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidin,DAB)顯色后,蘇木素復(fù)染,室溫干燥后封片,光鏡下觀察是否表達(dá)視紫紅質(zhì)、NSE、GFAP。選取至少10個隨機(jī)視野,每個視野在200倍物鏡下統(tǒng)計陽性細(xì)胞數(shù)和整個視野細(xì)胞總數(shù),計算陽性細(xì)胞率,測量值均以x±s表示,來對三種誘導(dǎo)條件下所表達(dá)的陽性細(xì)胞進(jìn)行分析。
1.10 數(shù)據(jù)分析方法
所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,并進(jìn)行雙因素方差分析。
2 結(jié)果
2.1 大鼠視網(wǎng)膜片光損傷電鏡觀察所見:光損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層,可見光感受器外段腫脹成圓形,盤膜結(jié)構(gòu)紊亂,疊狀結(jié)構(gòu)解離,膜間隙增大。內(nèi)節(jié)線粒體固縮和腫脹,空泡變性。染色質(zhì)濃染,核膜皺縮內(nèi)陷。
2.2 大鼠MSC細(xì)胞的鑒定(如圖1)
圖1 大鼠MSC細(xì)胞的鑒定
BMSCs流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果,培養(yǎng)的第三代BMSCs干細(xì)胞表面標(biāo)志CD90陽性(CD90+/CD34-:92%),基質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志CD44陽性(CD44+/CD34-:93%)
2.3 誘導(dǎo)分化的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察(如圖2)
A:3天后原來梭形的BMSCs胞體發(fā)生收縮,呈圓形或橢圓形,細(xì)胞邊緣變得不規(guī)整,有零星的細(xì)胞突起×300;B:4天后BMSCs有較多突起×300;
C、D:7天后,細(xì)胞發(fā)生遷移并相互之間建立突觸聯(lián)系×200;E:對照組BMSs分化細(xì)胞明顯減少,也少有建立突觸聯(lián)系的細(xì)胞×300。
圖2 誘導(dǎo)分化的BMSCs形態(tài)學(xué)觀察
2.4 誘導(dǎo)分化的視網(wǎng)膜樣細(xì)胞不同誘導(dǎo)條件下免疫細(xì)胞化
學(xué)染色表達(dá)指標(biāo)陽性率
表1 不同誘導(dǎo)條件下免疫細(xì)胞化學(xué)染色表達(dá)指標(biāo)陽性率
注:均方比F值為7.6054,F(xiàn)0.05=6.944,可見視網(wǎng)膜片三組間兩兩比較差異有顯著性(P <0.05)。
3 討論
3.1視網(wǎng)膜光損傷
視網(wǎng)膜是接受光能,形成視覺的重要組織結(jié)構(gòu),但也是眼組織中最易受到光損傷的部位。如果光照強(qiáng)度或光照時間超過了視網(wǎng)膜的承受能力,將會造成視網(wǎng)膜光損傷。
本實驗采用(50W,12V的鹵素?zé)糇鳛楣庠矗扇≈甭涫秸丈渖鲜龅男∨囵B(yǎng)皿,1950 ±200Lux)主要是考慮到以下幾點:①視網(wǎng)膜光損傷受諸多因素影響,內(nèi)在因素包括視網(wǎng)膜部位、體溫、膚色、年齡、種屬、營養(yǎng)狀態(tài)及晶體狀況,外在因素包括視網(wǎng)膜暗適應(yīng)狀態(tài)、光照射方式、光強(qiáng)度、波長和光照時間。因此本實驗選擇單純照射細(xì)胞而不是照射活體動物來盡量排除內(nèi)在因素的干擾,選擇成年SD白鼠是考慮到有研究表明白種人較黑種人容易損傷,大白鼠視網(wǎng)膜對光的敏感性隨著年齡的增加而增高。②視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷的敏感性隨著光波長的縮短而呈對數(shù)上升,因此短波長更易引起視網(wǎng)膜光損傷,角膜可吸收
3.2 MSC細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定
用組織工程技術(shù)體外分離和培養(yǎng)所需靶細(xì)胞,用于體內(nèi)相關(guān)疾病的細(xì)胞替代治療為多種疾病帶來了新的治療思路。因此有關(guān)此類的研究受到廣泛關(guān)注。胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性,但涉及倫理學(xué)問題,以往受到很大限制,發(fā)展緩慢。應(yīng)用眼色素上皮緣的視網(wǎng)膜干細(xì)胞[3]及鼠腦神經(jīng)先祖細(xì)胞移植[4]也由于供體組織有限性及安全性問題,不利于治療視網(wǎng)膜疾病的開展。于是有人把目光投向成體干細(xì)胞中的MSCs,因其來源于中胚層,可以跨系統(tǒng)甚至跨胚層分化為3個胚層來源的細(xì)胞,特別是中胚層和神經(jīng)外胚層來源組織的細(xì)胞(視網(wǎng)膜來源于胚胎期神經(jīng)外胚層),并且經(jīng)過20~30次細(xì)胞分裂后,這種分化特性也不會消失[5]。且分離培養(yǎng)方便。MSC存在于體內(nèi)多處如胎血、胎肝、胎脾、胎兒的骨髓以及成人骨髓[6], 臍血、脂肪組織和成人的外周血中亦含有數(shù)量極少的間質(zhì)干細(xì)胞[7],現(xiàn)多從骨髓中分離獲得。MSC的純化方法有貼壁篩選法,流式細(xì)胞儀分選法,密度梯度離心法,免疫磁珠法。較常采用的方法為貼壁篩選法和密度梯度離心法,或兩者聯(lián)合。MSCs的表面標(biāo)志具有非單一性,表達(dá)了間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞的表面標(biāo)志,一般認(rèn)為CD29、CD44、CD71、CD90、CD105、CD120a、CD124、CD166以及STRO-1、SH2、SH3是其重要的標(biāo)志物,流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)不表達(dá)造血細(xì)胞表面抗原如CD34、CD45、CD11a、CD14。如果能找到更特異性標(biāo)記物,就可以獲得更純的MSCs,這對后續(xù)的實驗步驟所得的實驗數(shù)據(jù)有重要影響。前2種方法分離所獲得的細(xì)胞純度較低,但具有良好的細(xì)胞分化能力。應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)和磁性分選技術(shù)針對細(xì)胞表面標(biāo)志進(jìn)行富集和分離,分選效率和純度均較高[8-9]。
3.3 MSC體外誘導(dǎo)成視網(wǎng)膜細(xì)胞
目前國內(nèi)外主要用生長因子誘導(dǎo)MSCs分化為視網(wǎng)膜細(xì)胞。Anthony K等[8]發(fā)現(xiàn)EGF、taurine或activinA體外誘導(dǎo)大鼠MSCs,有20%~32%表達(dá)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的表面抗原視紫紅質(zhì)。Anthony K等[8]應(yīng)用activinA(活化蛋白A),牛磺酸和EGF對成人CD90+MSCs體外誘導(dǎo)分化后,20%-32%的細(xì)胞表達(dá)感光細(xì)胞特異標(biāo)志―視紫紅質(zhì),視蛋白,recoverin。非視網(wǎng)膜來源的,可替代視網(wǎng)膜細(xì)胞功能的自體細(xì)胞是細(xì)胞移植治療視網(wǎng)膜變性疾病和視神經(jīng)損傷的理想種子細(xì)胞,目前國外有少量研究發(fā)現(xiàn)MSCs視網(wǎng)膜下移植可誘導(dǎo)分化為視網(wǎng)膜細(xì)胞,但由于體內(nèi)局部微環(huán)境復(fù)雜,影響因素繁多,移植細(xì)胞的分化方向不確定,往往無法定向分化成所需細(xì)胞,存在表達(dá)增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的潛在危險。而體外誘導(dǎo)MSCs定向分化為視網(wǎng)膜細(xì)胞仍是當(dāng)前研究的難點。國內(nèi)外僅數(shù)篇文獻(xiàn)報道用視網(wǎng)膜片培養(yǎng)上清液體外誘導(dǎo)MSCs分化為視網(wǎng)膜樣細(xì)胞,但均未對培養(yǎng)上清液成分進(jìn)行具體分析檢測,分析其有效成分。本實驗探索體外誘導(dǎo)MSCs定向分化的新途徑,可進(jìn)一步進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)檢測不同誘導(dǎo)微環(huán)境的蛋白差異,為構(gòu)建MSC體外誘導(dǎo)分化為視網(wǎng)膜細(xì)胞的微環(huán)境提供理論支持。這不僅解決了直接將MSCs體內(nèi)移植分化方向不確定的問題,以及應(yīng)用異體的人視網(wǎng)膜片誘導(dǎo)時可能引發(fā)排斥反應(yīng)等問題。
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經(jīng)過長達(dá)兩年的努力,益達(dá)微電影終于迎來了收官——男女主角歷經(jīng)一路的酸甜苦辣,分離與重逢,再次走到一起。
這是一段故事,更是一則廣告。
從抵制到期待,如今廣告主千姿百態(tài)、幻影叢生的營銷手段,已經(jīng)在不知不覺中充滿了你的視線。
廣告微電影發(fā)力
2011年10月份麥田映畫工作室出品的《愛瘋時代》,是這一行中的探路者。“去年歲末的累計點擊量達(dá)到2000多萬,進(jìn)了年度排名前三。”談到這個廣告片,導(dǎo)演麥田掩不住驕傲。表面看來,《愛瘋時代》是一部解讀當(dāng)下iPhone用戶心理的微電影,但在“不要讓世界因科技而冷漠”的宏大命題下,實則卻是與小米手機(jī)合作的廣告——雖然“小米”的字眼只在臨近片尾出現(xiàn)過一次。
新媒體的誕生,將傳統(tǒng)廣告拉下神壇,網(wǎng)絡(luò)成了營銷界的第二樂土。麥田們從草根中崛起,通過依托品牌,意圖找到與老百姓生活息息相關(guān)的情感故事,展現(xiàn)品牌價值觀以及人文關(guān)懷。
麥田稱之為“廣告電影”。
與傳統(tǒng)廣告不同,廣告微電影最大的特點就是故事性。“我們不做產(chǎn)品,只挖掘品牌價值。”麥田對記者表示,“我們相信每個品牌的背后都有一個感人的故事,只要找到與公眾的關(guān)聯(lián)性,就能引起共鳴。”而因講述故事的需要,勢必引發(fā)其另一特點——廣告微電影時間延長,一般會保持在3分鐘左右。《愛瘋時代》作為麥田的一次探索性嘗試,時長達(dá)到10分45秒。
同樣以網(wǎng)絡(luò)作為傳播平臺,但廣告微電影因其時長的因素,并不能像視頻前后貼片廣告一樣硬生生地推給受眾,只能以獨(dú)立視頻的形式呈現(xiàn)。正因此,一個優(yōu)質(zhì)的劇本創(chuàng)意才能在自傳播的網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下成為賺取點擊量、擴(kuò)大傳播面的制勝砝碼。
“當(dāng)時如果不借助蘋果,單純做小米,肯定達(dá)不到這樣的效果。”麥田坦言,“這是一次借力打力。”
視頻網(wǎng)站提供沃土
組織專業(yè)的團(tuán)隊,拍攝企業(yè)故事片成為近兩年的趨勢。這其中少不了“為自己代言”的聚美優(yōu)品。2012年11月7日,聚美優(yōu)品一則時長達(dá)1分39秒的新廣告片開始在網(wǎng)絡(luò)上被大量轉(zhuǎn)播。緊接著,并未滿足于此的聚美優(yōu)品又將廣告片搬到了湖南衛(wèi)視的黃金時段,引起熱議。
但不是所有的企業(yè)都有敢于如此砸錢的魄力與資本。視頻網(wǎng)站的興起,給了廣告主相比電視、報紙更廉價的營銷平臺。通過自行上傳視頻,引發(fā)受眾的關(guān)注。不管是借著江南Style的東風(fēng),各企業(yè)主大跳騎馬舞,還是桔子水晶酒店CEO“屌叔”吳海聚集40位猛男挑戰(zhàn)節(jié)操下限的《女王的盛宴》,都能在短時間內(nèi)通過結(jié)合熱點,贏取一定的點擊量。
據(jù)艾瑞咨詢提供的數(shù)據(jù),近三年來網(wǎng)絡(luò)媒體廣告市場規(guī)模以55%左右的年增長率成長起來,2012年預(yù)計可達(dá)到793.5億人民幣,基本與電視廣告861.3億人民幣持平。而在2005年,網(wǎng)絡(luò)媒體的廣告市場規(guī)模才只有40.7億人民幣,連電視廣告的零頭都比不過。這其中,視頻網(wǎng)站的興起功不可沒。
在艾瑞咨詢最新的《2012年第三季度中國網(wǎng)民行為&網(wǎng)絡(luò)廣告監(jiān)測數(shù)據(jù)》中顯示,2012年第三季度視頻網(wǎng)站的廣告收入攀升至7.9億,同比去年增幅為47.8%,2012年增速領(lǐng)先其他媒體類別,展現(xiàn)蓬勃的發(fā)展態(tài)勢。
“電視廣告從2007年開始,每年基本上都提價10%,很多企業(yè)已經(jīng)逐步退出了。另一方面,國家限制電視劇插播廣告以及黃金時段的控制,電視臺也會淘汰一部分企業(yè)。還有隨著人們收視習(xí)慣的改變,視頻網(wǎng)站的影響力越來越大,電視開機(jī)率也會降低。”引力傳媒股份有限公司市場總監(jiān)侯明廷對記者表示。
“屌絲氣質(zhì)”
從最初自己DV拍攝,感受網(wǎng)絡(luò)的魅力,到成立一個涵蓋攝影、美術(shù)、燈光等近30人的工作室,麥田用五年的時間見證了整個網(wǎng)絡(luò)環(huán)境的改變。
拍攝廣告微電影,已經(jīng)在今年為麥田帶來盈利。而麥田表示,相比傳統(tǒng)電視廣告而言,廣告微電影的制作成本更便宜,但消耗的時間長。從創(chuàng)意、策劃到執(zhí)行,最短3個星期,長則1至2個月。
“之前,寶馬的mini cooper找我們想給拍一個片子,但是因為給的費(fèi)用太少,我們根本做不到他想要達(dá)到的效果,所以就給拒了。”麥田認(rèn)為廣告主雖然在逐漸覺醒,但對此的投入力度與認(rèn)可度都不算高。在成熟的廣告領(lǐng)域,明星、資金、專業(yè)都不是問題。相比較之下,這個領(lǐng)域還充滿了“屌絲氣質(zhì)”。
同時,因其獨(dú)立視頻的形式,也造成在傳播度上的不可控性。“這類廣告點擊量達(dá)到1.5%就算不錯了,一般情況下為0.6%至0.8%。”侯明廷對記者表示。當(dāng)然,除了創(chuàng)意與口碑之外,視頻網(wǎng)站也承擔(dān)一定的推手作用。愛奇藝作為視頻網(wǎng)站的后起之秀,一直秉承著“高姿態(tài)”,未開放用戶上傳視頻功能。據(jù)愛奇藝內(nèi)容戰(zhàn)略合作總監(jiān)孫燕軍介紹,專門設(shè)置的廣告頻道上線不到100天,更多的是作為品牌類廣告的展示。“從欣賞性、藝術(shù)性考量通過試鏈等方式進(jìn)行內(nèi)容的推介”,與投入性廣告嚴(yán)格區(qū)分開來,并未與廣告主存在合作模式,但未來會希望能與廣告主、內(nèi)容方達(dá)成合作。
自傳播的網(wǎng)絡(luò)形態(tài),已經(jīng)讓麥田映畫從最初躲在幕后替他人做嫁衣的執(zhí)行團(tuán)隊,轉(zhuǎn)變?yōu)樽约洪_發(fā)客戶,獨(dú)立的制作、營銷公司。“但是現(xiàn)在,廣告微電影的銷售人才不多。這需要既懂電影運(yùn)作,又懂傳播規(guī)律,要求不低。”麥田笑稱,“所以現(xiàn)在都是我自己去談客戶。”
的等待與呼喚
與其說被神秘的命運(yùn)牽引,不如說她一直在找尋那個最真實的自己,直到她遇見了。
她是戴瑋,獅子座的哈爾濱女子,曾被稱為央視最美女導(dǎo)演,先后執(zhí)導(dǎo)了四十多臺大型文藝晚會;拍攝過近百首音樂電視作品……事業(yè)抵達(dá)巔峰,有名有利,但她真正快樂嗎?
答案是:不。
戴瑋漸漸厭倦了這份“很順”的工作,動了離開央視的念頭。這個念頭到了1999年秋天,逐漸明晰而確定。彼時,她來到雪域高原,擔(dān)任一場名為“雪域歡歌”的文藝晚會的總導(dǎo)演,為了準(zhǔn)備這臺晚會,戴瑋特地到各地采風(fēng),深入藏民生活、聆聽藏族音樂。美麗的自然人文風(fēng)情,狠狠襲擊著戴瑋的心,她的靈魂為之激動、欣喜。
晚會無疑是很成功的,但戴瑋并沒有很快回到北京邀功領(lǐng)賞,而是一頭扎進(jìn)的懷抱,聆聽大地的律動。
第一次踏入大昭寺,戴瑋著迷于那些虔誠的信徒:是什么力量促使他們不畏千辛萬苦來此朝圣?他們的臉上泛著平和寧靜的光芒,戴瑋想走近他們的內(nèi)心世界,心懷敬畏。
走出大昭寺時,天色已晚,一個年輕的喇嘛倚在門口,他的目光單純清澈,就像的天空,戴瑋心想,他在穿上袈裟的時候,能否知曉自己的命運(yùn)走向?他是否有過不甘和掙扎?或許,這只是一種世俗的追問。城市里的人大多被欲望牽著鼻子走,體會不到真正自由的心境。
戴瑋頓時覺得,沒有地方比更適合重新梳理自己的人生目標(biāo)。
幾天后,戴瑋和朋友去當(dāng)雄縣采風(fēng),中午在一家農(nóng)戶吃飯,他們十分熱情,給他們端上最美味的佳肴。農(nóng)戶家有個七歲左右的小女孩,扎著長長的辮子,漂亮,害羞,不停地給戴瑋和朋友們倒酥油茶,臨走時,戴瑋送了一個小禮物給女孩,她十分開心,笑時露出潔白整齊的牙齒,像遠(yuǎn)處山巒的雪。
小女孩追趕著送他們,藏族司機(jī)回頭說,我們采完風(fēng)還會經(jīng)過你家門口,說不定還要到你家喝茶呢,你家的茶很好喝。小女孩的臉上又露出羞澀的笑容,停下腳步朝戴瑋一行揮手。
黃昏,夕陽像金色的絲綢鋪在的草原,經(jīng)過農(nóng)戶區(qū)時,中午的小女孩正在村莊門口翹首等待,看到他們的車子經(jīng)過,她揮舞著小小的雙手招呼。
此情此景,逼出戴瑋的眼淚。被人信任和等待,是多么幸福的事啊!
就是這么一件件的小事,讓戴瑋對的認(rèn)識逐漸豐滿起來。她萌生了一個愿望,將自己在見過的每一個人,包括那個藏族小女該,那個小喇嘛,表現(xiàn)在自己的作品當(dāng)中。具體以哪種藝術(shù)載體來體現(xiàn)呢?戴瑋想到了小說、電視劇和電影。最后,她選擇了電影。不久,戴瑋離開了央視。
拍攝前,戴瑋這樣寫道:把自己放下,腳踏實地去做,給世界留下更多美好、善良和感恩的情懷,而不是抱怨、挑剔或者糟糕的批判,為了時代,為了文化表率,為了一個導(dǎo)演的本能、職業(yè)道德與社會承擔(dān)……
不為承諾,只為夢想
《岡拉梅朵》是戴瑋的第一部題材電影。看完劇本后,她的創(chuàng)作欲望一下被激發(fā),她希望拍出一部濃墨重彩描繪現(xiàn)代風(fēng)情的情感故事片,其中包含自己的成長體驗和對的熱愛。
2005年初,戴瑋組建好制作班子,找來好朋友、大名鼎鼎的音樂人撈仔作曲。一班人馬正準(zhǔn)備進(jìn)藏拍攝,誰料傳來消息,投資方突然撤了資。此時,戴瑋箭已上弦,雄心萬丈,她決定不管有沒有人投資,都要再組班子把她心中的這個夢完成。好友撈仔對她說:“我跟著你。”戴瑋大為感動,信心倍增。
為了《岡拉梅朵》能盡早開拍,戴瑋將自己十幾年的積蓄拿了出來。她的親朋好友都為她捏了把汗,中國嚴(yán)肅電影市場境況慘淡,像張揚(yáng)、賈樟柯、滕文驥這樣的名牌導(dǎo)演的電影作品都免不了遭受敗績,更不要說沒有拍過電影的戴瑋了,誰會看好她?她的積蓄很可能成為泡影。
戴瑋完全有理由、也有條件回頭,去國內(nèi)任何一家電視臺同樣風(fēng)光無限,但她沒有這樣做,反而連自己在北京的住房也抵押出去換了錢。
一番周折,終于湊齊資金的30%,戴瑋開始準(zhǔn)備前期拍攝。她的執(zhí)著與瘋狂感動了一個中學(xué)同學(xué),她目前已是北京一家著名文化公司的高管,她同意向《岡拉梅朵》投資。
《岡拉梅朵》是中國第一部現(xiàn)代題材的音樂電影,影片女主角安羽是一個后天失聲的啞女,她來到后所發(fā)生的悲歡離合的故事都是由音樂貫穿起來的,這是一個非常大膽而有突破性的嘗試,在中國的電影史上沒有人做過,因而對每一個參與者都是巨大的挑戰(zhàn)和誘惑。
2005年10月26日,戴瑋帶隊進(jìn)藏,開始正式拍攝。此時,已進(jìn)入冬季,白雪皚皚。戴瑋的拍攝,要看老天的臉色行事,可她又必須在年底之前封鏡。拍攝經(jīng)費(fèi)對于她來說更是橫在喉嚨處的一把利刃,隨著每一天的過去,利刃都會向喉嚨切進(jìn)。
那段時間,戴瑋幾乎是揉碎自己的心靈在拼搏,每天只睡兩個小時,她在有些憔悴的臉上涂了厚厚一層防曬霜,白得嚇人,看到同事怪怪的眼神,她嘀咕道:“我的臉是不是完蛋了?真的沒法兒見人了。”
最先確定的女主角是李小璐,她是冒著很大的風(fēng)險前來拍攝,因為小璐從小心臟不太好,她這次進(jìn)藏遭到除父親以外的全家人的反對,李父在反復(fù)看了劇本、反復(fù)斟酌了李小璐的身體情況后,決定讓女兒擔(dān)當(dāng)女一號,并親自陪伴女兒進(jìn)藏。電影里,李小璐演啞女,從頭到尾沒有一句臺詞,可影片又要她依靠神情和肢體把臺詞說出來,這對演員的功力要求很高,所以,她和父親都愿意接受挑戰(zhàn)。
但是,依然困難重重,持續(xù)的高原反應(yīng)導(dǎo)致李小璐不能繼續(xù)拍攝,不得不更換主角。期間,戴瑋又不幸出了車禍,有些工作人員難以堅持,拋棄曾向往的青稞酒、酥油茶的生活,逃回北京。所有的困難如大漠冰雪一般驟然來襲,戴瑋一度想到了放棄。但是,如果放棄不拍了,損失最重的則是朋友的投資,她心里過意不去:“我有勇氣接受任務(wù)帶人上去,現(xiàn)在卻沒有勇氣堅持下去,這不是我做人的標(biāo)準(zhǔn)。”
戴瑋堅持、擔(dān)當(dāng),沒有走到絕路,她不會放棄。在,她明白了,明天是未知的,什么都可能發(fā)生,她要做的,就是腳踏實地,咬牙挺胸,做好今天的一切。“困難不會因為你是女性就來得更溫柔一些,只因為你是導(dǎo)演是監(jiān)制,所以必須去積極面對,一切的責(zé)任都必須去有力承擔(dān)。”
隨后,韓國演員姜世貞替換李小璐,成為女一號,想不到這個異國女子竟能適應(yīng)高原的復(fù)雜氣候,很快投入到拍攝中去,戴瑋懸著的心終于放下來。
傳播愛與美
《岡拉梅朵》歷時三年,拍攝完畢。2008年3月,正式在全國院線上映。同年,該片獲得第十五屆韓國最高藝術(shù)獎――最佳外國導(dǎo)演獎,以及美國中美影展“金天使”獎。國內(nèi)更是好評如潮,被譽(yù)為新生代音樂電影地標(biāo)性作品、廣大“驢友”的旅游寶典。
戴瑋更加篤定自己的選擇:沒錯!這一切都是給予她的。
有次,戴瑋去北京西單附近的一家餐館吃飯,聽到兩個女服務(wù)員竊竊私語,“看,她是人!”戴瑋聽了想笑,但回頭看鏡子,她的臉上的確有了些微微的高原紅,皮膚粗糙了,眼睛清澈了。昔日那個在央視舞臺上叱咤風(fēng)云的美女導(dǎo)演哪里去了?,將戴瑋的人生分割成了兩段,前一段已十分遙遠(yuǎn)。
那里有世界上海拔最高的高原,空氣稀薄,陽光熾熱,天藍(lán)水凈,愛情單純而直接。剛到北京,戴瑋已開始思念,就像思念她遙遠(yuǎn)的家鄉(xiāng)。
重回,戴瑋無意讀到一本小說,是著名作家扎西達(dá)娃的《香巴拉的貓》,描寫第二次世界大戰(zhàn)初期,美國飛虎隊成員滇緬抗戰(zhàn)時,一架戰(zhàn)機(jī)在北部墜毀,幸存的飛行員在大草原上邂逅一個年輕美麗的藏族單身母親,她也被部族拋棄,兩人在逃亡之路上演繹了一出凄美的愛情故事……戴瑋看了兩遍,每次都感動得淚流滿面,她覺得這部作品讓她產(chǎn)生極大的共鳴感。就像文中的女主人公一樣,這個美麗、神秘、充滿誘惑和吸引的土地,讓她受盡折騰,卻又無法舍棄,深深眷念,深深愛著。
戴瑋給作家扎西達(dá)娃打電話:“你的這部小說太好了,我希望以后能拍它!”扎西達(dá)娃有點不屑:“拍電影,可沒那么簡單,這可是有時間、有年代感的戲,還有飛機(jī)的戲,你一個女導(dǎo)演可能有點難。”扎西達(dá)娃的話,讓戴瑋覺得大受打擊。不過,沒多久,兩個老熟人便坐在了一張桌上,戴瑋最終用自己的真誠和專業(yè)感動了扎西達(dá)娃,她順利簽下《香巴拉的貓》的電影版權(quán),取名《往事》。
相較《岡拉梅朵》,《往事》的拍攝十分順利,投資方和演員不請自來,這無疑是對戴瑋的一種肯定。何潤東、小宋佳等知名演員的加盟,更是讓《往事》剛剛開機(jī)便進(jìn)入了公眾視野。
這部電影里,戴瑋完全拋開了個性的喜好和成長經(jīng)驗,更遵循于故事本身。以宏大的歷史事件為背景,不動聲色地講完一個經(jīng)典的故事,電影風(fēng)格秉承了戴瑋一貫溫婉細(xì)膩的風(fēng)格,對畫面和音樂的把控尤其出彩。
2011年4月8日,《往事》上映。一位看過影片的觀眾激動地說:“在如今浮躁的大環(huán)境下,很多男性導(dǎo)演的作品都令人十分失望,卻還有像戴瑋這樣認(rèn)認(rèn)真真拍電影的女導(dǎo)演,把電影當(dāng)做一種信念來做,值得人們尊敬。”