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涇原兵變范文第1篇

糖尿病是一組能引起嚴(yán)重眼部并發(fā)癥的慢性代謝性疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn)：糖尿病早期在視網(wǎng)膜微血管病變之前，就出現(xiàn)視路神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能的異常改變。因此，導(dǎo)致糖尿病患者視功能障礙的原因，不僅在于視網(wǎng)膜微血管病變，還與視路多部位神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙有關(guān)。我們將從臨床觀察、視功能檢查以及組織形態(tài)學(xué)研究等方面對糖尿病視路神經(jīng)元病變的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】 糖尿??；視路；神經(jīng)元

Abstract　Diabetes is a chronic metabolic disease which can cause serious ocular complications. Recent findings indicated that in the early stage of diabetes， before the appearance of retinal capillary pathological changes， abnormal changes in neuronal structure and function in visual pathway have occurred. So the diabetic visual malfunction not only result from retinal capillary pathological changes，but also be related with the malfunction of neurons in many parts of visual pathway. This review will give latest findings about pathological changes of neurons in diabetic visual pathway from the aspects of clinic observation， visual function examine and histomorphology researches.

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KEYWORDS: diabetes; visual pathway; neurons

0　引言

糖尿病眼部并發(fā)癥是目前世界上最主要的致盲眼病之一。引起糖尿病視功能障礙最常見的原因?yàn)樘悄虿⌒砸暰W(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）與糖尿病性白內(nèi)障。而臨床上有一些糖尿病患者，其眼部檢查及熒光素眼底血管造影（fundus fluorescence angiography，F(xiàn)FA）等客觀檢查結(jié)果并不足以解釋視功能損害的程度。也有不少患者在眼底出現(xiàn)視網(wǎng)膜微血管病變之前，就已經(jīng)發(fā)生了視覺電生理等視功能檢測的異常。說明導(dǎo)致糖尿病患者視功能障礙的原因，可能不僅在于視網(wǎng)膜微血管病變，還與視路神經(jīng)元的病理改變有關(guān)。我們將從臨床觀察、視功能檢查以及組織形態(tài)學(xué)等方面對糖尿病視路神經(jīng)元病變的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1　臨床觀察

目前臨床對糖尿病性視神經(jīng)病變有一定認(rèn)識。其臨床表現(xiàn)多種多樣，輕者多無癥狀，重者常與視網(wǎng)膜病變并發(fā)，癥狀易被掩蓋。按DR分期統(tǒng)計(jì)：0～Ⅰ期DR患者約1/4伴有視神經(jīng)損害，而Ⅴ期DR患者85%以上均有視神經(jīng)異常[1]。糖尿病性視神經(jīng)病變分為五型：糖尿病視病變（diabetic papillopathy，DP）、前部缺血性視神經(jīng)病變（anterior ischemic optic neuropathy，AION）、后部缺血性視神經(jīng)病變（posterior ischemic optic neuropathy，PION）、糖尿病幼年型視神經(jīng)萎縮（Wolframs syndrome）和球后視神經(jīng)炎。Ignat等[2]臨床統(tǒng)計(jì)：在糖尿病視神經(jīng)受損的病例中AION居首位(59.2％)，其次為視神經(jīng)萎縮和PION(33.4％)，再者為球后視神經(jīng)炎(7.4％)。糖尿病是誘發(fā)AION最危險(xiǎn)的因素之一，該病在非動脈炎性AION中的患病率高達(dá)10％～35％[3]。糖尿病視神經(jīng)病變在FFA中可出現(xiàn)視盤局部（或全部）低熒光、遮蔽熒光、滲漏熒光或兼而有之的改變。利用FFA對糖尿病患者眼底觀察發(fā)現(xiàn)：高達(dá)48.3%患者眼底出現(xiàn)視神經(jīng)異常改變[1]。然而，由于發(fā)病的相對隱匿以及檢測手段的限制，臨床上對糖尿病視路上節(jié)段神經(jīng)元的病理損害及其所引起的視功能障礙了解甚少。

2　視功能檢查

視覺電生理檢查是反映視細(xì)胞和視覺傳導(dǎo)功能損害程度的一個(gè)定量指標(biāo)，有助于了解DR臨床前期和早期視覺通路的功能狀態(tài)。近年大量文獻(xiàn)報(bào)道，DR患者的視覺誘發(fā)電位（visual evoked potential，VEP）、視網(wǎng)膜電圖（electroretinogram，ERG）及對比敏感度等均有明顯改變，甚至當(dāng)眼底鏡下無DR改變時(shí)也可出現(xiàn)三者的異常。VEP反映從視網(wǎng)膜至視皮質(zhì)神經(jīng)纖維的功能狀態(tài)。糖尿病患者出現(xiàn)P100波潛伏期延長、波幅值降低的改變表明在有髓神經(jīng)纖維水平結(jié)構(gòu)的損害，與軸突節(jié)細(xì)胞聯(lián)結(jié)障礙密切相關(guān)[4]。對尚未出現(xiàn)DR的糖尿病患者進(jìn)行多焦ERG檢查發(fā)現(xiàn)：N1波與P1波的反應(yīng)密度均有所降低，表明在糖尿病早期視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞和雙極細(xì)胞也可能發(fā)生了相應(yīng)的病變[5]。色覺分辨是黃斑視功能的一個(gè)重要方面。DR 0期和1期的患者可出現(xiàn)軸向位于藍(lán)－黃的色覺異常，這種異?？赡芘c視網(wǎng)膜內(nèi)藍(lán)/黃刺激敏感的藍(lán)錐細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells，RGC）中藍(lán)色敏感神經(jīng)元數(shù)量的下降，以及傳遞藍(lán)/黃對比信息的神經(jīng)纖維較少有關(guān)[6]。這從另一角度證實(shí)了DR黃斑錐細(xì)胞及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的存在。

3　組織形態(tài)學(xué)研究

3.1　視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞損害

視網(wǎng)膜微血管病變被認(rèn)為是DR的重要特征之一，其發(fā)病機(jī)制與醛糖還原酶活性增強(qiáng)有關(guān)。 Chakrabarti等[7]早期研究發(fā)現(xiàn)醛糖還原酶不僅存在于糖尿病鼠視網(wǎng)膜毛細(xì)血管周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中，尚存在于RGC和Müller細(xì)胞的突起中。這提示糖尿病在引起視網(wǎng)膜微血管病變的同時(shí)，還可能導(dǎo)致了視網(wǎng)膜神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞代謝的異常。糖尿病可引起視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的退變，典型表現(xiàn)為RGC數(shù)量減少，視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層隨之變薄。Martin等[8]通過形態(tài)學(xué)測定發(fā)現(xiàn)：鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）性糖尿病大鼠在造模第14wk，RGC層的細(xì)胞減少20％～25％；TUNEL分析和caspase3檢測揭示：RGC層的細(xì)胞經(jīng)歷了“凋亡”的病理過程，電鏡分析顯示了核染色質(zhì)聚邊和細(xì)胞核皺縮等細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征。事實(shí)上，在DR前期視網(wǎng)膜微血管病變出現(xiàn)之前，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜從內(nèi)核層至神經(jīng)纖維層的神經(jīng)細(xì)胞均已經(jīng)發(fā)生了明顯的病理改變，由于神經(jīng)細(xì)胞的突起水腫明顯，壓迫其周圍微血管，可致血管管腔狹窄、閉鎖，進(jìn)而加重視網(wǎng)膜微血管的病變，這是造成DR的發(fā)病機(jī)制之一[9]。Greco等[10]對無視網(wǎng)膜微血管病變的青年型糖尿病患者研究發(fā)現(xiàn)，視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞層至RGC層的神經(jīng)元均較正常同齡人明顯減少，RGC功能也顯著下降。Park等[11]認(rèn)為糖尿病視網(wǎng)膜神經(jīng)組織退變是葡萄糖代謝異常所不可避免的結(jié)果，因?yàn)橐暰W(wǎng)膜神經(jīng)元的活動十分依賴于葡萄糖。其研究發(fā)現(xiàn)：STZ大鼠在造模4wk即出現(xiàn)RGC壞死及光感受器細(xì)胞凋亡；至12wk，一些無長突細(xì)胞和水平細(xì)胞也表現(xiàn)出壞死特征。這一研究再次證實(shí)了DR的視覺喪失除了源于視網(wǎng)膜微血管病變，還與視網(wǎng)膜光感受器等神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)質(zhì)性喪失密切相關(guān)。此外，由于糖尿病患者的RGC中表達(dá)一些促凋亡分子，從而使得RGC成為糖尿病視網(wǎng)膜中最易受損的細(xì)胞群體之一。谷氨酸（glutamate，Glu）是一種對視網(wǎng)膜神經(jīng)元具有興奮性毒性作用的物質(zhì)。糖尿病可造成視網(wǎng)膜中Müller細(xì)胞從胞外攝取Glu的能力下降。實(shí)驗(yàn)顯示高血糖模型建立4wk，Müller細(xì)胞即出現(xiàn)Glu轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，至13wk Glu轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性減少67％[12]。這種興奮性毒性物質(zhì)在視網(wǎng)膜中的堆積，也毫無疑問的對視網(wǎng)膜神經(jīng)元造成了損傷。

3.2　視神經(jīng)損害

糖尿病可引起視神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)的破壞和膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)中細(xì)胞器的損壞[13]。實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠造模6mo后，視神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維呈現(xiàn)不同程度的髓鞘脫失，髓鞘結(jié)構(gòu)疏散或變??；神經(jīng)軸索內(nèi)微絲部分溶解呈空泡狀，并富含腫脹變性的線粒體；退變的神經(jīng)軸索周圍伴見明顯的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生，膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞器變性[14]。糖尿病早期大鼠RGC逆行性軸漿流轉(zhuǎn)運(yùn)速度受到影響[15]，這種逆行軸漿流運(yùn)輸?shù)恼系K導(dǎo)致神經(jīng)營養(yǎng)因子不能通過正常的軸索運(yùn)輸?shù)竭_(dá)神經(jīng)元胞體，從而無法維持神經(jīng)元正常的生理功能，這也是造成神經(jīng)細(xì)胞退變、死亡的一個(gè)重要因素。

3.3　視中樞損害

糖尿病患者可出現(xiàn)學(xué)習(xí)、記憶和認(rèn)知功能的障礙，大腦體積和重量明顯減少，大腦皮質(zhì)神經(jīng)元丟失，形態(tài)和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，神經(jīng)遞質(zhì)代謝和傳遞的異常也是其神經(jīng)中樞損害的表現(xiàn)之一[16]。Shannon等[17]在“Wolfram綜合征”患者的大腦解剖中發(fā)現(xiàn)了視神經(jīng)、視交叉以及外側(cè)膝狀體等部位神經(jīng)元的變性、喪失，并可見視放射、海馬等部位廣泛的軸索營養(yǎng)失調(diào)。一系列研究發(fā)現(xiàn)：持續(xù)的高血糖狀態(tài)可導(dǎo)致大鼠視路三級神經(jīng)元（RGC、外側(cè)膝狀體、視皮質(zhì)）的Nissl小體呈現(xiàn)不同程度的溶解，細(xì)胞凋亡抑制基因Bcl2表達(dá)也明顯降低，表明視路神經(jīng)細(xì)胞在糖尿病過程中發(fā)生了不可逆的損害，細(xì)胞凋亡抑制作用也明顯降低[18]。綜上，糖尿病可引起視路不同部位神經(jīng)元組織形態(tài)學(xué)的病理改變，這種神經(jīng)元的實(shí)質(zhì)性損害是導(dǎo)致糖尿病視功能障礙的重要因素和形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。

4　展望

糖尿病可導(dǎo)致視路神經(jīng)元病變?yōu)樯钊胙芯刻悄虿⊙鄄坎l(fā)癥提出了新的課題。關(guān)于其確切的發(fā)病機(jī)制目前尚無統(tǒng)一的認(rèn)識。除了廣泛認(rèn)可的由高血糖引起的組織缺血缺氧和代謝紊亂之外，神經(jīng)元微環(huán)境中Glu代謝異常所導(dǎo)致的神經(jīng)毒性作用，神經(jīng)營養(yǎng)因子的剝奪和轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，以及凋亡相關(guān)因子的基因調(diào)控均有可能是重要的致病因素。對此，是否應(yīng)在糖尿病早期微血管病變出現(xiàn)之前引入神經(jīng)元抗凋亡治療以及補(bǔ)充外源性神經(jīng)營養(yǎng)因子有待于進(jìn)一步研究論證?；蛑委煹难芯砍晒菫樵摬〉呐R床治療帶來了廣闊的前景。隨著該病的病理和生化機(jī)制被不斷地認(rèn)識，早期發(fā)現(xiàn)并治療糖尿病視路神經(jīng)元病變將成為可能。

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涇原兵變范文第2篇

目的：觀察玻璃體腔內(nèi)注射腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Brain derived neurotrophic factor，BDNF）前后STZ糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）的水平及多巴胺能無長突細(xì)胞數(shù)目的變化。法：9周齡Wistar大鼠，鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）腹腔注射，制成糖尿病模型，于模型建立2wk后，大鼠眼玻璃體內(nèi)注射BDNF溶液，于模型建立4wk后，處死大鼠，取出眼球，取視網(wǎng)膜組織進(jìn)行Western blotting及視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色檢測，觀察視網(wǎng)膜中TH水平的變化，從而反映糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中多巴胺能無長突細(xì)胞水平的變化。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠未注射BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平降低，多巴胺能無長突細(xì)胞計(jì)數(shù)及灰度低于對照組，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組注射BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平、多巴胺能無長突細(xì)胞計(jì)數(shù)及灰度與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：在STZ糖尿病大鼠糖尿病早期，玻璃體腔內(nèi)注射BDNF可提高視網(wǎng)膜中TH的水平，提高多巴胺能無長突細(xì)胞的數(shù)目。

【關(guān)鍵詞】 Wistar大鼠　糖尿病視網(wǎng)膜病變　酪氨酸羥化酶　腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

Involvement of brain derived neurotrophic factor in early retinal neuropathy of diabetes in rats

Abstract AIM: To observe the changes of tyrosine hydroxylase (TH) protein levels and the density of dopaminergic amacrine cells before and after the administering brain derived neurotrophic factor (BDNF) protein into the vitreous cavities of streptozotocin (STZ) reduced Wistar diabetic rats. METHODS: Adult male Wistar rats， 9 weeks of age， were injected intraperitoneally with STZ to create diabetes. At 2 week after the models were created， BDNF protein was administered into the vitreous cavities of rats. At 4 week after the models were created， the rats were killed and the retina was removed for Western blotting and Whole-mount immunohistochemistry for TH to observe the changes of TH and dopaminergic amacrine cells in retina. RESULTS: The protein levels of TH， the number of positive staining dopaminergic amacrine cells and the staining gray scale of experimental group without BDNF were lower statistically. But there were no statistical differences between experimental group with BDNF and control group. CONCLUSION: In the early stage of STZ diabetic， administering BDNF protein into the vitreous cavities can increase TH protein levels and the density of dopaminergic amacrine cells in the STZ rats' retina.

· KEYWORDS: Wistar rats; diabetic retinopathy; tyrosine hydroxylase; brain derived neurotrophic factor

0引言

傳統(tǒng)的理論認(rèn)為糖尿病視網(wǎng)膜病變屬于微血管病變，但實(shí)際上它也是一種視網(wǎng)膜的神經(jīng)變性類疾病。在人類和實(shí)驗(yàn)動物中，在糖尿病發(fā)生后不久，且在血管并發(fā)癥出現(xiàn)之前，神經(jīng)元內(nèi)的分子功能就已經(jīng)發(fā)生變化。糖尿病中視網(wǎng)膜的神經(jīng)病變早于血管并發(fā)癥出現(xiàn)，并貫穿糖尿病的始終，嚴(yán)重危害患者的視力。許多研究都表明腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）在視網(wǎng)膜生理和病理生理過程中具有重要作用[1，2]，本文報(bào)道在糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)注射BDNF前后視網(wǎng)膜中酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）的水平及多巴胺能無長突細(xì)胞數(shù)目的變化，旨在初步探討糖尿病早期視網(wǎng)膜神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制。

1材料和方法

1.1材料 鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ），美國Sigma公司。TH免疫組化染色試劑盒，武漢Boster生物有限公司。BDNF凍干粉，美國Upstate公司。牛血清白蛋白（BSA），美國Sigma公司。平衡鹽溶液（BSS），美國Alcon公司。中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供健康成年近交系9wk齡雄性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量180~220g，眼部經(jīng)裂隙燈和檢眼鏡檢查屈光間質(zhì)清晰，眼底無病變。分籠飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，不限食水。飼養(yǎng)場所通風(fēng)良好，室溫18~25℃，相對濕度40%~70%，12h光照晝夜循環(huán)。尿糖試紙，桂林中輝科技發(fā)展有限公司。血糖儀，血糖試紙，德國羅氏公司。

1.2方法

1.2.1STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型 枸櫞酸鹽溶液0.1mmol/L（pH4.5），高壓滅菌，STZ濃度10g/L溶解于其中，使用前配制。大鼠禁食水12h，STZ 70mg/kg體質(zhì)量腹腔注射。其后48h，72h，1wk連續(xù)3次采尾靜脈血測空腹血糖，以空腹血糖高于16.7mmol/L為制模成功，且每周監(jiān)測尿糖1次、每2wk監(jiān)測血糖一次，將空腹血糖低于16.7mmol/L者剔除。

1.2.2動物的分組及處理 以成模鼠作為實(shí)驗(yàn)組，對照組腹腔注射同樣劑量的枸櫞酸鹽溶液（每組30只）。大鼠成模后4wk，100g/L水合氯醛3ml/kg體質(zhì)量腹腔注射全身麻醉后，摘除雙側(cè)眼球備用。頸椎脫位法處死大鼠。

1.2.3 BDNF的眼內(nèi)注射 于STZ或安慰劑腹腔注射后2wk開始，每3d注射1次，共5次。BDNF凍干粉1g/L溶于含1g/L牛血清白蛋白（BSA）的平衡鹽溶液（BSS）中。100g/L水合氯醛3mL/kg體質(zhì)量腹腔注射全身麻醉，20g/L利多卡因1滴表面麻醉成功后，隨機(jī)選取大鼠一側(cè)眼球，用微量進(jìn)樣器取上述溶液5μL注射入大鼠眼玻璃體腔內(nèi)，對側(cè)眼注入同樣劑量的含1g/L BSA的BSS溶液。將出現(xiàn)玻璃體出血或眼球萎縮者剔除。

1.2.4 Western blotting檢測 檢測TH的蛋白水平。將大鼠眼球置于顯微鏡下，去眼前節(jié)，小心分離出視網(wǎng)膜，將視網(wǎng)膜放入1mL EP管中，加入裂解液，冰上超聲，4℃離心，取上清液，－70℃下保存，待檢。酚試劑法蛋白定量，上樣時(shí)確保每個(gè)樣本的總蛋白量相同。大鼠抗-TH單克隆抗體（1:100倍稀釋）作為一抗，兔抗鼠IgG抗體（1:100倍稀釋）作為二抗。應(yīng)用BandScan軟件分析電泳條帶的灰度值。

1.2.5視網(wǎng)膜鋪片免疫組化檢測 將視網(wǎng)膜固定，脫脂，在1g/L的PBS液中水合，將視網(wǎng)膜切成若干瓣，內(nèi)界膜面向上，小心平鋪在載玻片上。將標(biāo)本放于含抗-TH單克隆抗體（1:100倍稀釋），5g/L Triton X-100的PBS液中4℃下孵育72h，PBS洗后，置兔抗鼠IgG抗體(1:100倍稀釋) 中4℃下孵育24h，PBS洗后，DAB顯色。中性樹膠封片后，置顯微鏡下觀察?？煞直娉龆喟桶纺軣o長突細(xì)胞。每張鋪片計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野中標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)目即可得到TH陽性細(xì)胞的數(shù)目。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)數(shù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ）表示，t 檢驗(yàn)，使用SPSS 12.0數(shù)據(jù)分析軟件包處理。

2結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)組及對照組視網(wǎng)膜中的TH蛋白水平 TH蛋白水平用同一泳道的β-actin水平來標(biāo)準(zhǔn)化可見，實(shí)驗(yàn)組大鼠未注射BDNF眼TH蛋白灰度明顯低于對側(cè)眼和對照組眼P

圖1　實(shí)驗(yàn)組大鼠未注射(A)與注射BDNF眼(B)、對照組未注射(C)與注射BDNF眼(D)TH蛋白水平

2.2實(shí)驗(yàn)組及對照組視網(wǎng)膜中TH陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和染色灰度 實(shí)驗(yàn)組及對照組視網(wǎng)膜每張鋪片分別計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野的TH陽性細(xì)胞數(shù)值，并取其平均值，實(shí)驗(yàn)組未注射BDNF眼的TH陽性細(xì)胞平均值明顯低于對側(cè)眼和對照組眼P

圖2　實(shí)驗(yàn)組大鼠未注射BDNF眼(A)的TH陽性細(xì)胞平均值明顯低于注射BDNF眼(B)

3討論

無長突細(xì)胞是一種視信號整合細(xì)胞，它有長的分支與其他細(xì)胞相突觸，可能使視網(wǎng)膜的功能協(xié)調(diào)一致。無長突細(xì)胞之所以得名是因?yàn)樵擃惣?xì)胞沒有軸突，無長突細(xì)胞的胞于內(nèi)核層的下層，與內(nèi)網(wǎng)狀層相毗鄰，從細(xì)胞體各個(gè)方向發(fā)出突起，沿著內(nèi)核層，進(jìn)入內(nèi)網(wǎng)狀層，與雙極細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相突觸。

轉(zhuǎn)貼于

多巴胺與人體許多并且非?；镜墓δ芟嚓P(guān)。在視網(wǎng)膜，多巴胺由無長突細(xì)胞釋放，并激活分布于視網(wǎng)膜上的多巴胺受體發(fā)揮作用。它在視網(wǎng)膜的功能中發(fā)揮重要和復(fù)雜的作用。其中一個(gè)人們感興趣的焦點(diǎn)是多巴胺在視網(wǎng)膜中的營養(yǎng)功能。包括生長、發(fā)育、細(xì)胞死亡，實(shí)驗(yàn)性近視等相關(guān)領(lǐng)域。目前的研究認(rèn)為，神經(jīng)視網(wǎng)膜與多巴胺能系統(tǒng)之間的相互作用是一個(gè)雙向的通路，多巴胺可能是神經(jīng)視網(wǎng)膜細(xì)胞間相互反饋的信使。

多巴胺有D1和D2兩個(gè)受體。多巴胺能無長突細(xì)胞的末梢與水平細(xì)胞成突觸，釋放多巴胺作用到水平細(xì)胞的D1受體上，降低水平細(xì)胞對光的反應(yīng)。多巴胺D2受體屬于多巴胺神經(jīng)元的自身受體，具有突觸前負(fù)反饋的功能，可以調(diào)節(jié)多巴胺能神經(jīng)元的多巴胺釋放。D1和D2受體之間相互作用完成多巴胺的生理功能。多巴胺可以刺激乙酰膽堿能神經(jīng)元，釋放乙酰膽堿增多。視網(wǎng)膜神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸（GABA），谷氨酸（L-glutamate）可以抑制視網(wǎng)膜多巴胺釋放，鉀離子可促進(jìn)多巴胺的合成。多巴胺可抑制血管活性腸肽的活性。多巴胺可刺激RPE生成環(huán)磷酸腺苷（cAMP），并降低血管活性腸肽刺激RPE分泌大分子物質(zhì)等[3]。多巴胺可與眾多神經(jīng)活性物質(zhì)發(fā)生相互作用，多巴胺能神經(jīng)元釋放多巴胺到光感受器和RPE上的多巴胺受體，通過與D1結(jié)合引起視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的變化，多巴胺是從視網(wǎng)膜到RPE的傳導(dǎo)媒介。此外多巴胺又通過D2抑制腺苷酸環(huán)化酶（AC）的酶活性，降低cAMP水平，反饋抑制多巴胺的釋放。因此，多巴胺在視網(wǎng)膜起神經(jīng)-激素作用[4]。多巴胺在維持正常視神經(jīng)功能中起著重要的作用。臨床資料表明：Parkinson’s病主要侵害多巴胺能神經(jīng)元，這種患者出現(xiàn)視網(wǎng)膜對比敏感度和分辨力等視功能損害的特征，這是因?yàn)槎喟桶纺苌窠?jīng)元功能不足影響了水平細(xì)胞（多巴胺敏感細(xì)胞）從而干擾了外周視覺[5]。

光刺激可以激活多巴胺能神經(jīng)元，在光照下，視網(wǎng)膜多巴胺合成、代謝明顯增強(qiáng)，多巴胺合成限速酶——TH的活性也明顯增強(qiáng)，在暗環(huán)境下光適應(yīng)的視網(wǎng)膜多巴胺神經(jīng)元功能下降，視網(wǎng)膜多巴胺及其代謝產(chǎn)物減少，多巴胺能控制與光和暗適應(yīng)的視網(wǎng)膜生理反應(yīng)，調(diào)節(jié)水平細(xì)胞對光反應(yīng)，減少細(xì)胞間的電聯(lián)接。

在哺乳動物視網(wǎng)膜，多巴胺能細(xì)胞于無長突細(xì)胞層，即內(nèi)核層和內(nèi)叢狀層的交界處。在脊椎動物視網(wǎng)膜中，多巴胺能神經(jīng)元的密度較低，約為10~100/mm2，但每個(gè)細(xì)胞均放射狀地伸出許多突起，足以覆蓋鄰近的多巴胺能神經(jīng)元。

多巴胺能神經(jīng)元通過調(diào)節(jié)多巴胺的合成和釋放來對多種刺激作出反應(yīng)，在此過程中，一個(gè)關(guān)鍵的角色就是TH，它是多巴胺合成的限速酶，它和多巴胺一樣，都分布于整個(gè)細(xì)胞，包括最為精細(xì)的突起和末稍[6]。因此TH蛋白水平是視網(wǎng)膜多巴胺能無長突細(xì)胞的標(biāo)志之一。

糖尿病中多巴胺能無長突細(xì)胞發(fā)生變性的可能機(jī)制如下：第一，嚴(yán)重的胰島素剝奪，見于STZ所致的糖尿病。研究認(rèn)為[7]，胰島素是體外無長突細(xì)胞生存的重要因子。第二，高血糖。體外培養(yǎng)結(jié)果表明[8]，過量的糖破壞視網(wǎng)膜中胰島素刺激細(xì)胞的生存和胰島素受體的信號傳遞。第三，視網(wǎng)膜Müller’s細(xì)胞功能障礙。糖尿病時(shí)，Müller’s細(xì)胞中谷氨酸-天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能降低[9]，并且天冬氨酸的合成遭到破壞[10]。這些功能障礙導(dǎo)致糖尿病視網(wǎng)膜谷氨酸水平增加，對無長突細(xì)胞具有毒性。BDNF對于對視網(wǎng)膜和視神經(jīng)損傷，視網(wǎng)膜缺血及化學(xué)性損傷、光感受器細(xì)胞的損傷后的恢復(fù)及再生等方面具有十分重要的作用，目前，它被認(rèn)為是抗凋亡劑、鈣通道阻滯劑和抗氧化劑。多巴胺能無長突細(xì)胞的變性可能導(dǎo)致BDNF水平的降低。小鼠bdnf基因的零突變可以導(dǎo)致多巴胺能無長突細(xì)胞的萎縮[11]。另據(jù)報(bào)道，在黑質(zhì)[12]及體內(nèi)[13]和體外[14]培養(yǎng)的視網(wǎng)膜無長突細(xì)胞中，BDNF可以阻止多巴胺能神經(jīng)元的死亡。神經(jīng)營養(yǎng)因子不能通過血腦屏障[15]，因此，它們對于視網(wǎng)膜神經(jīng)元的局部供應(yīng)很難保證。在本實(shí)驗(yàn)中，我們將BDNF直接注射入眼球，但在糖尿病患者中進(jìn)行神經(jīng)營養(yǎng)因子的玻璃體腔內(nèi)連續(xù)注射是可行性稍差。玻璃體腔內(nèi)或視網(wǎng)膜下植入持續(xù)釋放BDNF的細(xì)胞或裝置，應(yīng)用病毒載體進(jìn)行眼內(nèi)BDNF的基因轉(zhuǎn)移可能更為可行。

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涇原兵變范文第3篇

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組60例病人系2007年1月～2007年12月在我院住院病人，符合1999年WHO的2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，均伴有不同程度周圍神經(jīng)病變，隨機(jī)分為治療組30例，對照組30例。治療組男16例，女14例；平均年齡（55.6±9.4）歲；糖尿病病程（12.7±6.1）年；出現(xiàn)周圍神經(jīng)病變癥狀（7.2±6.2）年。對照組男18例，女12例；平均年齡（56.5±10.1）歲；糖尿病病程（11.8±5.8）年；出現(xiàn)周圍神經(jīng)病變癥狀（7.5±5.7）年。以上指標(biāo)兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），具有可比性。

1.2 治療方法 所有患者給予控制飲食、口服降糖藥物和（或）胰島素治療，每天監(jiān)測尿糖，保持血壓穩(wěn)定。治療組用阿魏酸鈉300 mg溶于生理鹽水250 ml中靜脈滴注,1次/d，同時(shí)給予胰激肽原酶120 U，po，每天3次，連用14 d。對照組單用胰激肽原酶120 U，po，每天3次，連用14 d。兩組實(shí)驗(yàn)期間禁用其他治療神經(jīng)病變、抗血小板、抗凝、纖溶及非甾體解熱鎮(zhèn)痛等藥物。

1.3 觀察項(xiàng)目 觀察兩組患者治療前后癥狀、體征變化及神經(jīng)反射（肱二頭肌、膝腱反射）情況，使用美國尼高利公司的肌電圖儀測定主側(cè)正中神經(jīng)、腓總神經(jīng)運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度（MNCV）和感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SNCV）。

1.4療效判定 顯效:自覺癥狀明顯好轉(zhuǎn)，腱反射明顯好轉(zhuǎn)或恢復(fù)，深淺感覺改善或恢復(fù)正常，MNCV、SNCV較前增加5 m/s以上或恢復(fù)正常。有效:自覺癥狀改善，腱反射有好轉(zhuǎn)，深淺感覺稍有好轉(zhuǎn)，MNCV、SNCV較前增加

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS8.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，全部數(shù)據(jù)用（x±s）表示，均數(shù)顯著性檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)，治療有效率的比較用x2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療后臨床療效比較 治療組在改善患者主觀癥狀方面效果明顯,總有效率為86.7%，顯著高于對照組（P

2.2 肌電圖檢測的結(jié)果 治療組應(yīng)用前列地爾聯(lián)合葛根素治療4周后正中神經(jīng)、腓總神經(jīng)的MNCV和SNCV顯著升高，明顯優(yōu)于對照組（P＜0.05），見表2。

3 討論

DPN是一種常見的糖尿病并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明， 較為復(fù)雜，目前認(rèn)為可能由多種原因所致， 首先是在本世紀(jì)初提出的血管性缺血缺氧假說，由于高血糖導(dǎo)致微血管病變，供應(yīng)營養(yǎng)神經(jīng)的血管發(fā)生病變而閉塞，導(dǎo)致神經(jīng)營養(yǎng)障礙，加之神經(jīng)細(xì)胞腫脹遂引起退行性病變。糖尿病微血管病變對DPN的發(fā)生發(fā)展起著重要作用［1］，大量的臨床和實(shí)驗(yàn)研究顯示造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血流動力學(xué)改變，致使周圍神經(jīng)組織缺血、缺氧；另外多元醇通路代謝增強(qiáng)、脂質(zhì)代謝異常、自由基增多、蛋白非酶糖基化、神經(jīng)生長因子(NGF)缺乏等，均可引起周圍神經(jīng)病變。NGF作用于身體感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)，這與DPN易累及的神經(jīng)組織相吻合，提示NGF合成減少、逆向軸漿運(yùn)輸障礙、NGF受體表達(dá)異?？赡苁荄PN的發(fā)生機(jī)制［2］。長期高血糖及微血管病變關(guān)系密切其主要病理變化為神經(jīng)纖維的萎縮、脫髓鞘以及滋養(yǎng)神經(jīng)的毛細(xì)血管基底膜增厚，玻璃樣變及周圍組織缺氧的微循環(huán)血流動力學(xué)改變［3］。

阿魏酸是一種非肽類內(nèi)皮素受體拮抗劑，阿魏酸鈉通過拮抗內(nèi)皮素受體來擴(kuò)張血管，增加周圍神經(jīng)組織的微循環(huán)灌注，從而改善神經(jīng)組織的缺血缺氧狀態(tài)；另外，它具有抗血小板聚集，對抗自由基及過氧化物對細(xì)胞的損害作用，對體外非酶促糖基化有抑制作用［4］。胰激肽原酶是一種蛋白水解酶又稱血管舒緩素或胰激肽釋放酶，屬于絲氨酸蛋白酶類，由18種氨基酸和4種糖蛋白所組成。胰激肽原酶可激活激肽原,激肽原釋放出激肽,激肽一方面具有松弛血管平滑肌、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)和降血壓作用；另一方面,激肽使微血管擴(kuò)張,微血管內(nèi)血流速度加快,使器官組織的血流灌注增加,代謝改善。胰激肽原酶還可以激活纖溶酶,提高纖溶系統(tǒng)活性,抑制血小板聚集,降低血液粘度、抑制血栓形成、防止微血管基膜增厚等改善微循環(huán)作用,有學(xué)者研究治療2型糖尿病血管并發(fā)癥的機(jī)制發(fā)現(xiàn),應(yīng)用胰激肽原酶前后的血漿內(nèi)皮素質(zhì)量濃度下降,氧化亞氮濃度增高,改善2型糖尿病患者內(nèi)皮系統(tǒng)功能,防止糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展［5］。因此胰激肽原酶能有效地改善糖尿病患者的神經(jīng)缺血及缺氧狀況。

本研究以阿魏酸鈉聯(lián)合胰激肽原酶進(jìn)行DPN的治療可顯著提高臨床療效，對DPN的癥狀、體征的改善均有良好作用，且無明顯毒副作用，治療效果明顯優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用胰激肽原酶。聯(lián)合治療組總有效率達(dá)86.7％，單藥組總有效率46.7％。正中神經(jīng)、腓神經(jīng)運(yùn)動或感覺傳導(dǎo)速度的改善兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明阿魏酸鈉聯(lián)合胰激肽原酶治療DPN是一種安全、有效的方法。

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涇原兵變范文第4篇

[關(guān)鍵詞] 胰激肽原酶片；甲鈷胺片；糖尿病周圍神經(jīng)病變

[中圖分類號] R587.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）11-0125-03

[Abstract] Objective To observe the clinical effects of pancreatic kiniogenase tablets combined with mecobalamin tablets in treatment of diabetic peripheral neuropathy（DPN）. Methods One hundred and fifty cases of outpatients with DPN were randomly divided into two groups： the treatment group （75 cases） and the control group （75 cases）. The treatment group with pancreatic kininogenase tablets and mecobalamin tablets treatment， minewhile，the control group using compound salvia tablets combined cobamamide tablets treatment， the period of treatment was 30 days. Results The remission of symptoms， tendinous reflex examination and nerve conduction velocity had been measured by comparing the three aspects， the efficacy of the treatment group was significantly better than the control group. Comparison between the two groups， the difference was statistically significant（P < 0.05）. Conclusion The efficacy of pancreatic kininogenase tablets and mecobalamin tablets in treatment of DPN is significant， it is worthy of application.

[Key words] Pancreatic kininogenase tabl； Mecobalamin tablets； Diabetic peripheral neuropathy

糖尿病周圍神經(jīng)病變（DPN）是糖尿病患者常見的慢性并發(fā)癥之一，主要表現(xiàn)為四肢末端疼痛和感覺障礙。臨床治療缺乏特效藥物，本研究采用胰激肽原酶片聯(lián)合甲鈷胺片治療DPN，效果滿意，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

所有病例均為2012年1月～2013年4月我院內(nèi)分泌門診患者。入選患者均符合《中國2型糖尿病防治指南》（2010版）中有關(guān)DPN的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，同時(shí)排除其他原因引起的神經(jīng)病變。150例患者采用隨機(jī)分組。治療組75例，男37例，女38例，年齡24～76歲；糖尿病病程5～22年；神經(jīng)病變病史0.5～14年。對照組75例，男38例，女37例，年齡26～75歲；糖尿病病程7～25年；神經(jīng)病變病史0.5～12年。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，兩組患者的性別、年齡、病程、病變嚴(yán)重程度比較無顯著差異（P > 0.05）。

1.2 治療方法

依據(jù)《中國2型糖尿病防治指南》（2010版）中有關(guān)DPN的治療原則，兩組患者在研究過程中均根據(jù)患者具體情況給予相關(guān)基礎(chǔ)治療（如抗血小板、調(diào)脂、控制血壓、控制血糖達(dá)標(biāo)）。治療組：①胰激肽原酶腸溶片（怡開，常州千紅制藥），240 U，tid，空腹服用。②甲鈷胺片[彌可保，衛(wèi)材（中國）制藥有限公司]，0.5 mg，tid，po。對照組：①復(fù)方丹參片，3片，tid，po；②腺苷鈷胺片，1.5 mg，tid，po。兩組患者觀察時(shí)間均為30 d。

1.3 觀察指標(biāo)

①所有患者在治療前檢查踝反射、膝反射、痛覺、震動覺及壓力覺，仔細(xì)評價(jià)自覺癥狀及疼痛、麻木程度并記錄結(jié)果；治療30 d后復(fù)查上述各項(xiàng)指標(biāo)并與治療前比較。②測定治療前后運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度及感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度結(jié)果并比較。

1.4 療效評定

依據(jù)《中國2型糖尿病防治指南》（2010版）中有關(guān)DPN的診斷依據(jù)[1]，并參考相關(guān)臨床研究[2]，制定如下療效評定標(biāo)準(zhǔn)：①癥狀改善情況：包括患者自覺疼痛、麻木等癥狀的緩解程度。治療效果分為顯效、有效、無效三個(gè)等級：顯效：患者自覺疼痛、麻木程度明顯好轉(zhuǎn)或消失；有效：自覺癥狀減輕但仍存在；無效：治療前后癥狀無改變。②腱反射恢復(fù)情況：顯效：踝反射、膝反射明顯改善或恢復(fù)正常；有效：有好轉(zhuǎn)但未完全恢復(fù)正常；無效：治療前后無變化。③神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定：顯效：神經(jīng)傳導(dǎo)速度增加>5 m/s或者恢復(fù)正常；有效：神經(jīng)傳導(dǎo)速度改善，但是

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用四格表χ2檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)過30 d治療，兩組疼痛、麻木癥狀均有改變，治療組總有效率88.0%，對照組總有效率70.7%，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.87，P=0.02

3 討論

糖尿病慢性并發(fā)癥主要為大血管病變（心臟病、高血壓、腦血管意外及下肢血管病變）、微血管病變（糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎?。┘吧窠?jīng)病變等。一般認(rèn)為，糖尿病慢性并發(fā)癥的形成是由于糖尿病患者長期的血糖控制不良所引起。糖尿病周圍神經(jīng)病變是糖尿病慢性并發(fā)癥中較為常見的一種，其診斷依據(jù)和檢查方法主要有：①明確的糖尿病病史或確診糖尿病的依據(jù)。②出現(xiàn)感覺運(yùn)動異?；蛑参锷窠?jīng)功能明顯改變的臨床表現(xiàn)。③神經(jīng)電生理檢查的異常改變，神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢。④神經(jīng)傳導(dǎo)功能檢查具有客觀、敏感、無創(chuàng)、可靠等特點(diǎn)，目前可作為臨床工作中診斷DPN的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。臨床治療上一般采用綜合治療措施，從控制血糖、抗凝、抗血小板、調(diào)脂、改善微循環(huán)、營養(yǎng)神經(jīng)等多個(gè)方面治療。

胰激肽原酶是一種蛋白水解酶，能使激肽原降解成激肽，具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、調(diào)整血壓等作用；同時(shí)還能夠激活纖溶酶原，提高纖溶系統(tǒng)和膠原水解酶活性，起到防止血凝、抗血栓和防止基底膜增厚等生理作用。其作用機(jī)制[5，6]：①降解激肽原，生成激肽，從而擴(kuò)張小血管和毛細(xì)血管，改善血管通透性及血流量。②通過緩激肽和組胺多肽對血栓烷B2（TXB2）的負(fù)反饋，促使血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生PGI2，從而抑制血小板效應(yīng)以防止凝血。③激活纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶，以提高纖溶活性，降低血漿中纖維蛋白含量，有利于防止血栓形成。④降低腎血管阻力、心肌耗氧量及減少心肌細(xì)胞缺氧缺糖性損傷，從而起到增強(qiáng)心肌收縮力、改善心功能和增加血流量的作用。臨床用于治療糖尿病引起的微循環(huán)障礙及其他閉塞性周圍血管病，如糖尿病腎病、周圍神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病、眼底病及缺血性腦血管病具有良好的療效[7]。腺苷鈷胺為細(xì)胞合成核苷酸的重要輔酶，在體內(nèi)參與多種代謝過程，可促進(jìn)神經(jīng)髓鞘中脂蛋白的形成，有助于神經(jīng)損傷的修復(fù)[8]。甲鈷胺是一種內(nèi)源性的輔酶B12，參與一碳單位循環(huán)，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)過程中起重要作用[9]，能夠促進(jìn)DNA、RNA以及卵磷脂的合成，從而提高髓鞘的形成，促進(jìn)修復(fù)損傷的神經(jīng)組織，改善神經(jīng)組織傳遞及代謝障礙，促進(jìn)軸索內(nèi)運(yùn)輸和軸索再生[10]。臨床研究證實(shí)，甲鈷胺對DPN的恢復(fù)有很好的療效[11]。

本次臨床研究使用胰激肽原酶片聯(lián)合甲鈷胺片治療DPN，從患者臨床癥狀減輕、腱反射恢復(fù)情況及神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定等不同方面均提示其對DPN具有良好的治療作用。同時(shí)，所有患者在服藥治療過程中，均未出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)及過敏現(xiàn)象，提示兩種藥物有良好的臨床治療安全性，因此值得臨床推廣應(yīng)用。

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涇原兵變范文第5篇

[摘要]目的探討頸椎后縱韌帶膠原和蛋白多糖含量變化在頸椎病發(fā)病機(jī)制中的意義。方法收集脊髓型頸椎病患者下位頸椎后縱韌帶15份作病例組，同年齡段正常下位頸椎后縱韌帶10份作對照組。Weossner法測定兩組總膠原含量，酶聯(lián)免疫吸附法測定Ⅱ型膠原含量，間苯三酚分光光度法測定蛋白多糖含量的變化。Masson染色后對比觀察后縱韌帶的顯微結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)。結(jié)果 病例組總膠原和蛋白多糖含量均低于對照組，Ⅱ型膠原含量較對照組高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

[關(guān)鍵詞]頸椎?。缓罂v韌帶；膠原；蛋白多糖

頸椎病是以頸椎間盤退變?yōu)橹饕∽兓A(chǔ)，導(dǎo)致頸周圍肌肉、關(guān)節(jié)繼發(fā)性改變和相鄰椎體退變增生，從而直接壓迫神經(jīng)血管，誘發(fā)與之相關(guān)臨床癥狀和體征的疾病。后縱攜帶退變在頸椎病的發(fā)病因素中占重要地位。大量研究表明，頸椎后縱攜帶蛻變與基因、環(huán)境等多種因素有關(guān)。目前國內(nèi)外在生物化學(xué)水平對椎間盤及黃韌帶中膠原和蛋白多糖等物質(zhì)的微量變化進(jìn)行了大量研究，但對頸椎后縱韌帶生物化學(xué)定量變化的研究鮮見。

本實(shí)驗(yàn)對頸椎病患者的頸椎后縱韌帶總膠原、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的含量進(jìn)行測定，并探討其含量變化在頸椎病發(fā)病機(jī)制中的意義。

1　資料和方法

1.1　病例選擇

(1)病例組。選取本院2005年10月至2006年5月收治中的15例脊髓型頸椎病手術(shù)患者的c4－c5或C5－C6頸椎后縱韌帶，并去除明顯骨化塊部分。其中男9例，女6例，年齡47－63歲，平均54歲。頸椎病診斷根據(jù)臨床癥狀、體征及常規(guī)x線、MRI檢查結(jié)果。(2)對照組。取10份平素身體健康，生前無糖尿病史、頸肩痛病史及家族性頸椎病史，因車禍等意外死亡者的C4－C5和C5－C6頸椎后縱韌帶。其中男6例，女4例，年齡45－60歲，平均52歲，在死亡后12h內(nèi)取材。標(biāo)本用生理鹽水沖洗血跡，吸水紙吸干表面的水分，鋁錫紙密封放入－80度冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2　主要試劑和儀器

標(biāo)準(zhǔn)羥脯氨酸(Sigma，美國)，酶標(biāo)器(Bio Red，美國)，Ⅱ型膠原酶聯(lián)免疫測定試劑盒(TPI Inc，美國)，Masson三色試劑盒(福建邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)。

1.3　總膠原蛋白含量測定

采用Woessner方法測定羥脯氨酸，間接推算組織中總膠原蛋白含量。具體方法如下：標(biāo)本脫水、脫脂、烘干、稱重，加100倍樣本量的鹽酸(6mol?L-1)在110度分解24h；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除鹽酸，雙蒸水溶解殘留物；加氯胺T溶液室溫靜置20min，加過氯酸溶液室溫靜置5min，加對苯胺基苯甲醛溶液置60度溫箱20min，取出待冷卻；在波長560nm處測定吸光值，通過羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測液內(nèi)的羥脯氨酸濃度，以此推算組織總膠原蛋白含量。

1.4?、蛐湍z原含量的測定

標(biāo)本稱重，脫水、脫脂，0.4mol?L-1乙酸浸泡過夜，在冰浴下制備成勻漿，以鹽析法提取膠原。ELISA法測定Ⅱ型膠原，按試劑盒說明書的步驟進(jìn)行，在波長450nm下測定Ⅱ型膠原的濃度，計(jì)算含量。

1.5　蛋白多糖含量測定

采用間苯三酚分光光度法測定光密度值，轉(zhuǎn)換為量值作蛋白多糖含量的測定。

1.6　組織病理學(xué)觀察

標(biāo)本用10％福爾馬林浸泡過夜，脫水、透明、浸蠟、切片，Masson染色，光鏡觀察。

1.7　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果表示，數(shù)據(jù)用SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間差異比較應(yīng)用兩組均數(shù)的￡檢驗(yàn)，P

2 結(jié)果

2.1　標(biāo)本大體觀察

病例組后縱韌帶質(zhì)地變硬、彈性減低、色澤發(fā)白，部分可觸及質(zhì)地硬的骨化塊。對照組后縱韌帶質(zhì)地柔軟濕潤、富有彈性、有光澤。

2.2　羥脯氨酸含量

病例組羥脯氨酸含量為(39.47±0.85)mg?g-1，總膠原蛋白含量為(394.7l±8.48)mg?g-1；對照組羥脯氫酸含量為(49.96±1.83)mg?g-1，總膠原蛋白含量為(499.58±18.31)mg?g-1。經(jīng)檢驗(yàn)，兩組間羥脯氨酸含量和總膠原蛋白含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

2.3Ⅱ型膠原含量

病例組Ⅱ型膠原含量為(112.08±17.98)mg?g-1，對照組Ⅱ型膠原含量為(92.43±16.25)mg?g-1。經(jīng)檢驗(yàn)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

2.4　蛋白多糖含量

病例組蛋白多糖含量為(22.6±4.0)mg?g-1，對照組蛋白多糖含量為(64.1±12.2)mg?g-1。經(jīng)檢驗(yàn)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

2.5　組織病理學(xué)觀察

光鏡觀察見膠原纖維呈藍(lán)色，彈性纖維呈紅色。病例組出現(xiàn)較多的纖維變性區(qū)，彈性纖維減少，甚至呈灶狀缺失，膠原纖維增多，纖維腫脹，界限模糊，外形不規(guī)則，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，細(xì)胞密度較高(圖1)。對照組頸椎后縱韌帶主要由膠原纖維和彈力纖維組成，纖維呈波浪狀，排列規(guī)則，與韌帶縱軸一致。纖維間細(xì)胞稀疏，主要為纖維細(xì)胞，細(xì)胞成梭形，長軸與纖維走向平行。

3　討論

3.1　頸椎后縱韌帶的病理變化

后縱韌帶以膠原纖維及彈性纖維為主，膠原纖維使韌帶組織具有一定的強(qiáng)度和剛度。膠原纖維中膠原蛋白含量的多少、纖維走行，以及韌帶的形狀、尺寸、截面積，與載荷方向一致的纖維數(shù)量決定著后縱韌帶的強(qiáng)度。頸椎后縱韌帶承擔(dān)著頸椎的張力載荷，有防止椎間盤后突出和限制脊柱過度前曲的作用，對頸椎穩(wěn)定性有重要作用。Ono等通過病理研究發(fā)現(xiàn)。頸椎病患者頸椎后縱韌帶基質(zhì)有纖維性和非纖維性組織增生。本實(shí)驗(yàn)病理觀察結(jié)果顯示，與對照組相比較，病例組頸椎后縱韌帶發(fā)生明顯的退性變，其纖維之間的緊密聯(lián)系喪失，纖維排列紊亂，膠原纖維和彈性纖維網(wǎng)斷裂，纖維間隙增寬，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，且呈玻璃樣變性。膠原纖維減少及其排列紊亂、斷裂，使后縱韌帶強(qiáng)度和剛度降低。這樣反過來改變原有頸椎生物力學(xué)的平衡，加重頸椎不穩(wěn)。由此可見，頸椎后縱攜帶退變對頸椎病起到惡性循環(huán)的作用。

3.2　頸椎后縱韌帶總膠原變化

本實(shí)驗(yàn)中采用羥脯氨酸作為半定量測定總膠原的指標(biāo)。與黃韌帶、椎間盤等檢測結(jié)果不同的是，本實(shí)驗(yàn)測得的結(jié)果顯示，病例組總膠原較對照組減少。由于退變的頸椎間盤內(nèi)處于高壓狀態(tài)，椎體不穩(wěn)導(dǎo)致頸椎后縱韌帶長期處于緊張狀態(tài)，纖維被拉伸，韌帶的血管受到擠壓，血液供應(yīng)減少，影響韌帶的代謝。缺血缺氧狀態(tài)妨礙膠原的合成及組織的修復(fù)。據(jù)此，我們推測經(jīng)椎間盤退變是導(dǎo)致頸椎后縱韌帶膠原減少的重要原因之一。

3.3　頸椎后縱韌帶Ⅱ膠原含量改變

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Ⅱ型膠原含量增加。Ⅱ型膠原為軟骨膠原，它可以使韌帶更能承載抗壓應(yīng)力，Ⅱ型膠原的分泌與軟骨細(xì)胞及類軟骨細(xì)胞相關(guān)。Yasui等對正常和頸椎病韌帶膠原分布進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)肥厚頸椎韌帶的基質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原增加，Ⅱ型膠原主要包繞類軟骨細(xì)胞。提示頸椎后縱韌帶呈骨化傾向與Ⅱ型膠原含量增加有關(guān)。

3.4　頸椎后縱韌帶蛋白多糖的變化

蛋白多糖為韌帶一種重要成分，帶有大量的負(fù)電荷，產(chǎn)生一定的固定電荷密度，對水及陽離子具有較大的親和力；其體積龐大，可為組織提供良好的水合空間，以維持后縱韌帶中的水分。蛋白多糖能維持膠原纖維排列的有序性，防止膠原纖維的降解。蛋白多糖聚合體還可阻止基質(zhì)的鈣化，使韌帶富有彈性。因此，蛋白多糖聚合體在維持后縱韌帶的生理功能及防止其退變方面都起到重要的作用。