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細胞免疫治療范文第1篇

【關鍵詞】DC-CIK細胞免疫；惡性腫瘤；臨床分析

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2015）06-0067-02

大多數的惡性腫瘤與人體的免疫功能之間具有緊密聯系，機體的免疫功能逐漸下降和失調，就會加大惡性腫瘤的發生率。由于免疫系統對惡變的細胞沒有識別和清除作用，從而容易導致腫瘤細胞能夠逃脫免疫系統的屏障，對人體造成一定的影響[1]。在惡性腫瘤的治療方面，傳統治療方式主要是通過放化療來殺傷惡性腫瘤，并且需要在機體免疫功能的幫助下才能夠完成。其治療效果較低，對患者的影響較大，因此，需要研究出更加有效的治療方式。本研究通過采用DC-CIK細胞免疫治療方式治療惡性腫瘤，并取得了較好的治療效果，現報道如下：

1.資料與方法

1.1一般資料

選取我院2014年2月至2015年2月收治的21例惡性腫瘤患者，男性14例，女性7例，年齡段為42-75歲，平均年齡為（56.2±3.4）歲。所有患者均為肝癌患者。

1.2方法

1.2.1DC、CIK細胞的培養

樹突狀細胞DC培養：首先，需要通過血細胞分離機將患者外周血單個核細胞，通過使用1.077g/ml的淋巴細胞分離液分離，并將其分離出來的單個核細胞洗滌兩次后，使用相關的無血清培養基將其混懸在細胞培養裝置中，并放入到溫度為37℃的5%二氧化碳培養箱中，兩小時之后移出，并加入1000μ/ml人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子GM-CSF和500μ/mlIL-4進行培養，每隔兩到三天換液一次，并且對其細菌和真菌培養進行檢測。另外，CIK細胞的培養時，可將上述的懸浮細胞通過無血清培養基進行適當的調整，并加入適量的CD3單抗細胞，同樣放在溫度為37℃的5%二氧化碳培養箱中培養24小時，并加入適量的γ-干擾素、IL-2，每隔兩到三天換液一次，并且對其細菌和真菌培養進行檢測，通過誘導證實為DC細胞和CIK細胞。

1.2.2DC、CIK細胞的回輸

在細胞培養的時候，需要對細菌霉菌進行檢測，如果其檢測為陰性，且活細胞超過90%后，DC需要使用細胞刷取細胞，通過一系列的離心、洗滌處理后，根據患者不同的病情分為腋下注射、雙側頸部注射以及淋巴引流區皮下注射。另外CIK通過一系列離心、洗滌之后，采取靜脈注射。

2.結果

所有患者通過治療后，有1例患者由于治療無效死亡，其余患者的癥狀均得到好轉。患者的病情得到有效的緩解，自覺癥狀均消失，睡眠質量有所提高，免疫力逐漸增加。其中有1例患者通過化療后無明顯改善，通過1個療程的免疫治療后，其影像學對比顯示病灶明顯縮小。

3.討論

在臨床醫學中，針對惡性腫瘤的治療，通常會采取手術治療、化療、生物免疫治療以及放療等方式。上述幾種方式在治療腫瘤的時候，雖然可以有效的緩解腫瘤的惡化，但是治標不治本，并且存在一定的缺陷和不足，尤其是化療治療會產生較大的副作用，最明顯的是患者頭發脫落。不僅影響患者的美觀，還會對患者生理以及心理產生一定的影響。DC-CIK細胞免疫治療主要是在上個世紀八十年代開始研發和使用的，通過對淋巴因子激活的殺傷細胞以及單抗激活的殺傷細胞等進行研究和分析，這些細胞均具有一個共同的特點，具有較強的殺腫瘤活性，但是其細胞的擴增比較緩慢，細胞的殺瘤活性不夠強，在臨床上應用具有一定的局限性。相關研究者報道，CIK細胞可以通過人體外周血單個核細胞的分離，并在體外多種細胞因子的環境下，與單抗激活的殺傷細胞一同培養后，獲得一種全新的細胞，稱之為自然殺傷細胞樣T淋巴細胞，該細胞不僅具備T淋巴細胞抗瘤活性的特點，還具備NC細胞的殺瘤作用，與傳統的免疫療法相比，CIK細胞的治療效果更好，已經成為惡性腫瘤治療中的新興治療方法[2]。

DC（樹突狀細胞）其抗原呈遞功能較強，具有較好的調控作用，可以在腫瘤的免疫和調解中發揮出較大的作用。DC不僅具有激活原始T細胞增殖的作用，還具有較強的抗原傳遞能力，并且與CIK細胞相結合，可以將兩者的優勢和作用優化與整合，在治療惡性腫瘤的過程中，能夠發揮出最大化的作用和效果[3]。

本研究通過對我院收治的21例惡性腫瘤患者進行分析研究，結果顯示，通過采用DC-CIK細胞免疫治療，取得了較好的治療效果，患者的癥狀均得到好轉，自覺癥狀均消失，睡眠質量有所提高，免疫力逐漸增強。其中有1例患者通過化療后無明顯改善，通過1個療程的免疫治療后，其影像學對比顯示病灶明顯縮小。表明采用DC-CIK細胞免疫法治療惡性腫瘤，可以有效的提高治療效果，增強細胞的抗腫瘤效果，在臨床治療惡性腫瘤的過程中，是一種比較理想的方法。

綜上所述，采用DC-CIK細胞免疫治療惡性腫瘤具有較好的療效，且細胞增殖速度較快，其對機體免疫系統的結構和功能的損傷較小，并且具有較強的殺瘤作用，但是由于DC-CIK細胞免疫治療方法的臨床應用時間較短，還有較多的問題需要優化和完善。

參考文獻：

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細胞免疫治療范文第2篇

【關鍵詞】 細胞因子誘導的殺傷細胞;免疫治療;腎癌;護理

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.03.139

細胞免疫治療法是一種應用最廣、最成熟的腫瘤生物治療技術。通過在實驗室中應用高端生物技術對殺癌免疫細胞進行大量的活化培養， 使其具有高效識別和殺滅癌細胞的能力， 再回輸到患者體內， 以達到治療腫瘤的目的。CIK細胞即細胞因子誘導的殺傷細胞是將人體外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子共同培養后而獲得的一群異質細胞， 具有強大的抗瘤活性和非限制性殺瘤的優點。有著廣泛的適用性， 對腎癌有極強的殺傷活性（60%～90%）。CIK是一種新型高效且具有廣譜惡殺腫瘤的免疫活性細胞[1]。CIK細胞治療是目前免疫細胞療法中常見的治療方法， 適用性廣。本科近期收治1例腎癌伴肺轉移患者， 經過1個療程14次CIK細胞回輸到患者體內， 取得了滿意的治療效果。現將護理體會匯報如下。

1 臨床資料

患者， 男， 51歲， 因“左腎癌術后4年余， 發現雙肺轉移半年余”于2014年3月20日收治入科， 患者無誘因出現無痛性血尿， 系統檢查診斷為：左腎癌。2010年5月20日行左腎切除術。術后病理：腎透明細胞癌， 于干擾素治療3個月， 定期復查。2013年4月11日復查CT示：雙肺結節， 疑轉移， 未行治療。近來本科就診， 病情進展， 無咳嗽、發熱、胸悶等主訴， 精神食欲可， 大小便正常， 要求細胞免疫治療。查體：一般狀況可， 神志清， 精神可， 發育正常， 營養中， 等， 自動， 步入病房， 皮膚鞏膜無黃染， 心肺正常， 腹平軟、切口瘢痕愈合佳， 無壓痛， 肝脾不腫大， 無移動性濁音， 腸鳴音正常。診斷：左腎癌， 術后雙肺轉移。

2 護理方法

2. 1 心理護理 絕大部分的癌癥患者都接受過多種治療， 不僅身體受到了各種治療后副作用的影響， 同時也付出了大量的財力， 且疾病的預后仍不容樂觀， 患者及家屬心理負擔大。CIK細胞回輸是一種全新的腫瘤生物治療方法， 患者及家屬要花更多的時間來接受和認可它[2]。護士應用通俗易懂的語言讓患者及其家屬了解細胞免疫治療的原理、方法等。通過反復講解， 使患者及家屬解除疑惑和恐懼心理， 爭取患者及家屬的全力配合[3]。因此護理人員對患者及家屬提出的疑問應耐心解釋及時正確回答患者及家屬的問題， 使其解除顧慮， 樹立戰勝疾病的信心， 保證患者順利度過整個治療過程， 提高護理質量。

2. 2 細胞采集的護理

2. 2. 1 細胞采集前的護理 采血前1 d責任護士到床邊進行健康教育， 告知患者及家屬細胞采集前1 d及采血當天可以進食， 但應以清淡飲食為主， 并保證充足的睡眠， 盡量避免到人多密集的公共場所， 注意保暖， 防止受涼感冒。采血當天復查血常規、肝功能、凝血功能等指標。采血室采血前1 h停止人員走動， 紫外線消毒室內1 h。

2. 2. 2 細胞采集時及采集后的護理 采血操作是一項無菌操作， 由受過專業培訓的護士操作， 操作前戴口罩。使用一次性血細胞分離機分離吸附置換治療套件（型號 PIYA white blood cell set）， 根據患者的身高、體重等調節參數， 一般調至4個循環。操作前講解采血注意事項及所需時間， 以取得患者配合。囑患者平臥， 放松心態， 告知患者如有不適及時示意護士， 整個采血過程中由1名專職護士陪同并持續心電、血壓、血氧飽和度監測， 必要時吸氧， 做好記錄。采血過程一般1 h左右， 由于時間較長， 為了分散患者的注意力， 避免患者緊張導致血管收縮、痙攣， 護士與患者進行有效的溝通， 并為患者提供輕松愉快的環境， 如聽輕音樂等， 使患者情緒保持穩定。及時記錄各項參數及患者反應， 如有異常及時通知醫生進行處理。細胞采集結束后， 拔針前教會患者正確按壓針眼的方法， 拔針后按壓穿刺處10 min左右， 直至不出血為止。告知患者穿刺處當天不可洗浴， 以防穿刺處感染， 穿刺肢體避免劇烈運動， 保證足夠的睡眠， 避免勞累。囑患者平臥30 min， 無不適后方可離開。

2. 3 CIK細胞回輸的護理

2. 3. 1 CIK細胞回輸時注意事項 培養好的細胞由實驗室醫師與回輸護士雙人共同核對， 無誤后簽字， 方可回輸給患者。細胞是血液制品， 使用一次性輸血器裝置進行回輸， 回輸前用0.9%生理鹽水50 ml緩慢沖管， 確保在血管內。準確核對患者姓名后， 換注CIK細胞輸注， 應快速輸入， 每3～5分鐘輕輕搖動細胞瓶1次， 以防止細胞沉淀， 并保證在1 h內輸完， 以維持細胞最佳活性， 保證回輸細胞質量和數量。回輸過程中護士應加強巡視， 仔細觀察患者反應， 注意穿刺處有無紅腫、疼痛等反應。若門診患者， 應在回輸結束后囑患者觀察30 min，無不適后方可離開。

2. 3. 2 常見不良反應的觀察及護理 細胞回輸最主要及常見的不良反應是發熱， 應加強觀察患者體溫變化， 若體溫≤38.5℃， 給予多飲水， 物理降溫;若體溫>38.5℃， 應通知醫生， 遵醫囑給予對癥處理， 出汗較多時應及時更換衣服及床單位。同時消除患者的不安情緒， 安慰患者。但不可應用地塞米松， 因地塞米松是一種免疫抑制劑， 可能會影響DC-CIK細胞療效[4]。其次若患者穿刺處皮膚發現紅腫、疼痛， 應立即拔除針頭， 更換針頭后重新穿刺， 抬高患者， 并給予硫酸鎂外敷。

3 小結

CIK細胞是人外周血單個核細胞在體外經過多種細胞因子培養后獲得的異質細胞， 增殖活力強， 兼有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性， 輸入患者體內后發揮特異性的抗腫瘤作用[5]。CIK細胞在實驗室培養7～8 d后開始回輸， 患者經過1個療程的精心護理及治療， 病情穩定， 生活質量得到提高， 食欲增強， 睡眠改善， 患者壽命得以延長。精心的護理和精湛的技術， 可消除患者精神上及肉體的痛苦， 增強患者對醫務人員的信任感[6]。

參考文獻

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細胞免疫治療范文第3篇

記者：目前治療腫瘤技術有哪些方法?它們在臨床應用中有哪些特點?

李忠義：目前，以手術為主，還有放療和化療，但副作用大，會引起患者惡心、迷糊、嘔吐、厭食、脫發。眾所周知，放、化療殺傷癌細胞的同時也殺死正常細胞，引起病人白細胞降低、免疫力下降、加速癌細胞轉移，且反復使用導致病人對化療、放療不敏感。

大量的臨床結果證明，抗炎致敏樹突狀細胞(APDC)疫苗和放、化療結合治療效果更為明顯，不但能提高治愈率和緩解率，提高整體療效，而且能降低放、化療的副作用。

記者：樹突狀細胞為什么會對腫瘤治療產生影響?

李忠義：樹突狀細胞(dendritic cells Dc)是一類具有典型樹突狀形態、表面高表達MHC－Ⅱ類分子、能移行至淋巴器官和刺激初始型T細胞增殖活化的細胞。是已知的機體內功能最強的抗原遞呈細胞(anttgen-presenting cells，APC)，也是目前發現的唯一能直接激活初始型T細胞的APc，能夠誘導患者機體產生腫瘤特異性、持久的主動免疫應答。

其特點為：(1)是機體內功能最強、最有效的抗原遞呈細胞，能攝取各類抗原。(2)表達豐富的MHC分子、共刺激分子、黏附分子及高水平的Thl型應答主導因子11－12。(3)顯著刺激初始型T細胞增殖，體內、外均能激發T細胞增殖，誘導特異性CTL生成。(4)由Dc激活的細胞免疫，特別是細胞毒性T淋巴細胞(CTL)介導的免疫反應，在機體抵御惡性腫瘤和傳染性疾病中發揮著十分重要的作用。

記者：樹突狀細胞腫瘤免疫治療的原理是什么?

李忠義：人體在正常情況下，能夠通過免疫系統識別和清除突變的癌細胞，利用免疫監視機制防止腫瘤的發生。但當人體免疫力低下的時候腫瘤細胞可逃逸免疫監督系統，抑制有效的免疫應答，導致腫瘤的發生。

APDC疫苗是一種新的腫瘤免疫治療方法，是我院與上海第二軍醫大學免疫中心合作開展的多項具有國際水平的生物治療項目之一，是腫瘤治療中的尖端技術。

大量的基礎和臨床研究的結果顯示，應用APDC能夠激發機體腫瘤特異性的細胞毒性T淋巴細胞，有效地殺傷腫瘤細胞，并且能夠建立起持久的抗腫瘤的特異性免疫應答。因此，我們采用患者自身腫瘤細胞抗原，致敏患者自身樹突狀細胞，制備成瘤苗回輸患者，取得了滿意的結果。

目前我們研制的新型樹突狀細胞瘤苗“抗原致敏的人樹突狀細胞”已通過期臨床研究，經國家食品藥品監督管理局批準并經過臨床藥理委員會通過，進行并完成了Ⅱ期臨床研究。

APDC疫苗是一種對不同腫瘤病人分別進行的治療，具有高度的個性化、較好的臨床療效以及良好的安全性，在國際學術會議上和我國學術界均受到高度評價。美國杜克大學遺傳和細胞治療中心的研究主任埃利一吉爾波瓦說過”APDC是激發機體免疫系統抵御癌癥侵襲的有效途徑之一。”

記者：樹突狀細胞腫瘤免疫治療將對腫瘤治療產生什么樣的影響?

李忠義：采用“抗原致敏的人樹突狀細胞”進行腫瘤生物基因治療。樹突狀細胞(Dendritic Cell，DC)是目前發現的功能最強的專職性抗原遞呈細胞(Antigen-presenting Cells，APC)，能攝取和加工遞呈抗原，具有強大的激活T細胞的能力，控制著體內免疫反應的過程，在免疫應答中處于中心地位，因而成為腫瘤免疫反應的中心環節。

樹突狀細胞腫瘤疫苗技術在第37-39屆ASCO和第7屆CSCO年會上成為最令人囑目、最鼓舞人心的焦點。國際著名免疫學家肯蕭特曼教授認為：這是一項令該領域的絕大多數研究者驚奇和關注的工作。這一發現是免疫學理論的重要突破，將帶動免疫學領域的發展。

記者：使用該技術一個療程需要多長時間?

李忠義：采用患者術后留取的腫瘤組織制備多肽抗原(也可采用中心抗原庫提供和制備的腫瘤多肽抗原)和分采的血液中提取“樹突狀細胞”，進行自體細胞體外誘導培養擴增，而后分4次回輸患者體內，用大量增殖的APDC喚醒免疫系統，對癌細胞發起攻擊，消滅癌細胞，22天為一個療程。

記者：在什么時候實施該技術治療效果最好?不同階段實施該技術后有什么樣不同的效果?

李忠義：手術后的患者更適合進行生物治療，既能防止癌細胞的復發與轉移，又能殺死已經轉移而且檢測不到的單個癌細胞。

專家簡介：

細胞免疫治療范文第4篇

【關鍵詞】 封閉抗體； 復發性流產； 淋巴細胞； 免疫治療

【Abstract】 Objective：To investigate the clinical efficacy of recurrent spontaneous abortion （RSA） using lymphocytes active immunotherapy.Method：80 cases of patients with RSA which were diagnosed by blocking antibody screening were randomly divided into the treatment group（40 patients） and the control group （40 patients）.The patients in the treatment group were treated by LIT with peripheral blood lymphocytes，the patients in the control group with traditional miscarriage treatment（progesterone plus hCG），then the pregnancy outcomes were compared.Result：In the treatment group，32 cases of pregnancy were treated successfully， and the success rate was 80%，including 16 patients with full-term delivery （50%），16 cases with late pregnancy， 8 cases of abortion.In the control group，there were 16 cases with successful pregnancy，the success rate was 40%，including six cases with term birth（37.5%），10 cases with late pregnancy，24 cases of abortion.By comparison，there was significant difference in the two groups（P

【Key words】 Blocking antibodies； Recurrent spontaneous abortion； Lymphocytes； Immunotherapy

復發性流產（Recurrent Spontaneous Abortion，RSA）患者往往經歷了多次妊娠后的自然流產（連續或不連續流產次數≥2次）[1]。是一種常見的妊娠期并發癥，發生率占育齡婦女的1%～5%。RSA可有單一病因或多病因引發，其病因復雜性較高，已知引起復發性流產的常見原因有：染色體異常、生殖系統機能紊亂及結構畸形、內分泌失調、婦科感染等，此外應強調，近年來發現封閉抗體缺乏也會導致RSA。相關文獻表明，復發性流產原因不明患者達到52%以上，其中與免疫因素有關的RSA患者又達到79%以上[2]。目前，治療RSA的方法中，以淋巴細胞主動免疫為主。國外對主動免疫治療RSA的作用機制進行了研究，尚未完全闡明。我國也已經將主動免疫治療RSA應用于臨床中，相關報道顯示，患者再次妊娠成功率不盡相同[3-4]。選擇2010年12月-2012年12月自然流產或胚胎停育2次或2次以上的RSA患者（自愿參與治療），經臨床篩查證實40例患者均由于缺乏封閉抗體缺乏而致RSA，并對40例患者進行淋巴細胞免疫治療，療效明顯，詳細報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取深圳仁愛醫院2010年12月-2012年12月不明原因早期自然流產（包括生化妊娠，IVF-ET種植失敗）及胚胎停育2次或2次以上的RSA患者（自愿參與治療）80例，經臨床篩查證實患者均由于缺乏封閉抗體缺乏而致的RSA，40例患者采用淋巴細胞主動免疫進行治療（LIT）。另40例作為對照組，對照組采用傳統保胎治療（黃體酮加hCG）。治療組年齡23～41歲，平均28.3歲；2次自然流產者21例（其中有2例2次IVF-ET種植后流產者），3次自然流產者6例，4次自然流產者3例，5次自然流產者2例，5次以上自然流產者2例，2～3次胚胎停育者5例，孕3胚胎停育2產1者1例。對照組年齡19～43歲，平均29.1歲，有2次自然流產者29例，3次流產者11例。兩組一般資料比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 流產的病因篩查及方法 本研究中，要求所有研究對象簽署知情同意書。所有RSA患者符合以下條件：（1）封閉抗體檢查陰性；（2）生化妊娠及早期（12 W前）自然流產史≥2次，或胚胎停育≥2次，或自然流產+胚胎停育≥2次；（3）夫婦雙方染色體檢查正常，無家族遺傳病史；（4）雙方行TORCH（包括巨細胞病毒、風疹病毒、單純皰疹病毒和弓形體）、梅毒、HIV、乙型肝炎、丙型肝炎檢查均為陰性；（5）生殖道衣原體、支原體、淋球菌等檢查均為陰性；（6）內分泌檢查、甲狀腺功能及空腹血糖正常；（7）抗抗體、抗子宮內膜抗體、抗卵巢抗體、抗心磷脂抗體均為陰性；（8）排除生殖道畸形和形態學異常；（9）分析男方，各項指標顯示正常；（10）治療前，所有患者未使用過影響免疫功能的藥物。

1.2.2 治療方法 對照組采用傳統保胎治療（黃體酮加hCG）。治療組采用淋巴細胞主動免疫（LIT）。治療方法：無菌下抽取患者丈夫或血緣親屬或無關自愿健康個體靜脈血20 mL，肝素抗凝，在無菌條件下分離淋巴細胞，將淋巴細胞懸液裝于注射器中，給予患者兩前臂內側行多點皮下或皮內注射，每側注射3～4點。2～3周治療1次，4～6次為一療程。治療一療程后復查封閉抗體，若已轉為陽性，要求3～5個月內盡快妊娠。確診妊娠后，再加強LIT一療程（2～3周1次，共4次）至妊娠14～16周。若轉陽后半年內仍未能妊娠，應每隔8～10周鞏固一次LIT，以使封閉抗體不轉陰。部分復查封閉抗體陰性者，再加強LIT治療2次，若仍未轉陰也可考慮備孕。

1.3 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對本次研究所有數據進行統計學分析，計數資料用 字2檢驗，P

2 結果

2.1 兩組妊娠成功率比較 治療組妊娠成功32例，8例流產，成功率為80%；對照組妊娠成功16例，24例流產，成功率為40%，兩組妊娠成功率比較差異有統計學意義（ 字2=12.03，P=0.0005），治療組明顯優于對照組。詳見表1。

2.2 封閉抗體陽性組與陰性組妊娠結局比較 主動免疫治療后，34例患者封閉抗體轉為陽性，其中妊娠成功29例，成功率為85.3%；6例封閉抗體仍為陰性者，妊娠成功2例，成功率為33.3%，兩組比較差異有統計學意義（ 字2=5.20，P=0.022）。詳見表2。

3 討論

正常孕婦的血清中，存在一種特異性IgG抗體（抗配偶淋巴細胞的），現代生殖免疫學證實，該抗體可抑制MLR（淋巴細胞反應）。封閉母體淋巴細胞的細胞毒作用，可作用于胚胎滋養層，使得輔助T細胞對胎兒抗原抑制物的識別無法正常完成；同時，母親免疫系統不會攻擊胚胎，也是由于封閉母體淋巴細胞的作用[5]。MIF，即封閉抗體，是封閉同種抗原刺激淋巴細胞產生的巨噬細胞移動抑制因子，成為BA或稱為Antipaternallymphocyte anti body（簡稱為APLA）。國外相關研究表明，缺乏封閉性抗體與復發性流產存在密切的關系。本次研究中，使用了淋巴細胞主動免疫治療，該方法對RSA治療的效果較好，但作用機制不明。眾多學者對復發性流產的治療進行了持續的研究，黃芳等[6]通過黃酮體及hCG聯合淋巴細胞主動免疫對42例復發性流產患者進行了觀察，認為該方案治療黃體功能不全導致的復發性流產患者的有效率達100%，治療封閉抗體陰性的復發流產患者后的妊娠率達57.89%，并認為hCG及黃酮體聯合淋巴細胞主動免疫是治療復發性流產患者的可靠方案；譚玉清等[7]采用丙種球蛋白聯合淋巴細胞免疫對84例復發性流產患者進行了治療，認為淋巴細胞主動免疫聯合丙種球蛋白靜脈滴注治療復發性流產患者的妊娠成功率在90%以上，因此認為該方案具有可靠的應用價值。

對于封閉抗體陰性者，主要采用淋巴細胞免疫治療（LIT），等到患者體內封閉抗體升高時進行受孕，妊娠的成功率可達到80%～90%[8]。Beer和Tayor于二十世紀七十年代創立，并于1978年開始應用于RSA的一種免疫療法。對同種免疫型RSA患者采用丈夫或他人淋巴細胞進行同種致敏治療，抑制母胎間的細胞性免疫性排斥反應，減少流產率。梁寶珠等[9]對100例確診的復發性流產患者進行分析，認為免疫治療后，封閉抗體陽性率升高，從封閉抗體陽性者妊娠成功率方面將，再次妊娠患者成功率明顯高于陰性者（P

臨床醫學界認為，人類白細胞抗原Th1/Th2失衡及組織相容性與復發性流產存在相關性，Th2細胞是在正常妊娠情況下的主要細胞因子，而復發性流產患者的血清中Th1因子是主要的優勢細胞，因此可以通過配偶淋巴細胞主動免疫的方式對復發性流產患者進行治療，通過提高母體Th2型細胞因子，控制Th1型細胞因子，增強母體的免疫耐受[10]。我國的彭桂元等采用淋巴細胞主動免疫法治療991例RSA患者，治療效果明顯，患者妊娠成功率大大提高，可達到80%以上，提示在RSA治療方面，淋巴細胞主動免疫治療具有較好療效[11]。本研究結果顯示，治療組和對照組的妊娠成功率分別為80%和40%，觀察組明顯優于對照組（P

為此，應將淋巴細胞主動免疫治療應用于RSA（缺乏封閉抗體）的臨床治療中，患者預后免疫反應很強，基本未出現不良反應，且妊娠成功率顯著提高，該方法具有較高的臨床應用價值。

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細胞免疫治療范文第5篇

【關鍵詞】 骨肉瘤

【Abstract】 AIM: To evaluate the therapeutic effectiveness of tumor vaccine from fusion of dendritic cells (DCs) with the osteosarcoma cells in osteosarcoma. METHODS: The UMR106 cell line was injected subcutaneously into the SD rat thigh laterally to establish the animal model. DCs obtained from SD rat bone marrow were propagated in vitro under the condition of rGMCSF， rIL4 and nrhTNFα. DCs were purified by monoclonal antibody OX62 and magnetic beads. Then the UMR106 cell line was fused with DCs to obtain the tumor vaccine and the therapeutic effectiveness of the tumor vaccine to the original tumor and lung metastasis in the animal model was observed. RESULTS: Six weeks after the treatment with tumor vaccine， the weight of the original tumor and the rate of lung metastasis in the therapeutic group were both largely reduced compared with those in control groups （P

【Keywords】 dendritic cells；osteosarcoma；immunotherapy

【摘要】 目的: 探討大鼠樹突狀細胞(dendritic cells， DCs)融合瘤苗在骨肉瘤免疫治療中的應用. 方法: 用大鼠骨肉瘤細胞系UMR106建立大鼠骨肉瘤動物模型，應用重組大鼠rGMCSF， rIL4和nrhTNFα培養大鼠骨髓前體細胞獲得大量DCs，經標抗大鼠OX62 mAb免疫磁珠分離純化后的DCs經形態學觀察、表型檢測、功能學實驗鑒定，然后將細胞系UMR106與大鼠樹突狀細胞融合作為瘤苗應用于荷瘤大鼠，觀察其抑制腫瘤生長和肺轉移的效果. 結果: 在治療6 wk時治療組和對照組相比，瘤重明顯減小（P

【關鍵詞】 樹突狀細胞；骨肉瘤；免疫治療

0引言

骨肉瘤是常見的惡性程度極高的骨源性腫瘤，患者往往在術前就已經有了微小肺轉移灶，加之局部復發，預后很差. 由于放療的不敏感、化療的抗藥性等局限，臨床上愈加關注對骨肉瘤開展免疫治療的研究，制備腫瘤疫苗為其主要手段之一. 樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)是目前為止發現的功能最強的專職抗原提呈細胞（antigen presenting cell，APC），由于其形狀似樹突而得名. 它對誘導初次免疫應答具有獨特的功能，能攝取和加工提呈抗原，表達高水平的MHC分子、共刺激分子、黏附分子并分泌高水平TH1型細胞因子IL12，啟動T細胞介導的免疫反應. 目前關于DCs在腫瘤免疫治療中的應用，已經成為腫瘤免疫治療的熱點之一. 我們應用大鼠骨髓來源的DCs與大鼠骨肉瘤細胞系UMR106融合，制備腫瘤疫苗，觀察其治療效果，探討其臨床應用的可能性.

1材料和方法

1.1材料

儀器和主要試劑: MiniMACS磁性分離儀(德國Miltenyi Biotec GmbH公司)；流式細胞儀(美國BD Phar Mingen公司)；細胞融合儀(BTX公司的2001型)；大鼠骨肉瘤細胞系UMR106(美國American Tissue Culture Collection）；6～8 wk齡SD大鼠(第四軍醫大學實驗動物中心提供)；小牛血清和RPMI 1640培養基(美國HyClone公司)；淋巴細胞分離液(上海華精生物高科技有限公司)；rGMCSF， rIL4 (R＆D公司)；新型重組人腫瘤壞死因子nrhTNFα(第四軍醫大學生物技術中心)；FITC標記抗大鼠MHCⅠ和MHCⅡ， FITC標記抗大鼠OX62， PE標記抗大鼠CD80， PE標記抗大鼠CD86(英國Serotec公司).

1.2方法

1.2.1細胞培養與融合

1.2.1.1制備大鼠骨髓細胞將健康雄性6～8 wk SD大鼠斷頸處死，浸入750 mL/L的乙醇中10 min，無菌手術取出雙側股骨和脛骨，剝凈肌肉組織，用PBS洗滌2遍，剪去骨兩端，再洗滌2遍；用無菌注射器抽取5 mL無血清RPMI 1640，將其針頭分別從兩端插入骨髓腔，反復沖洗出骨髓直至骨變白，收入50 mL離心管中，1500 r/min離心收集骨髓細胞，棄上清，沉淀細胞用5 mL無血清RPMI 1640重懸，再經淋巴細胞分離液密度梯度離心，初步純化單個核細胞(mononuclear cells，MNCs)，離心洗滌2次，收集沉淀的骨髓細胞.

1.2.1.2DCs的培養擴增取初步純化的MNCs，重懸于含100 mL/L的小牛血清的RPMI 1640培養液中，置于50 mL細胞培養瓶中，加細胞因子rGMCSF(終濃度為1×106 U/L)，rIL4（終濃度為0.5×106 U/L）及nrhTNFα(終濃度為1×106 U/L) ［1-3］，于37℃，50 mL/L CO2條件下培養，每3日半量換液，補加細胞因子1次，于第12日收獲懸浮細胞.

1.2.1.3DCs的形態學檢測倒置顯微鏡每日觀察細胞生長情況及形態變化并攝片；掃描電鏡觀察由我校電鏡中心協助完成.

1.2.1.4DCs的表型檢測選用FITC標記的MHCⅠ， MHCⅡ和OX62，PE標記的CD80、CD86，分別收集誘導前4， 8和12 d細胞懸液，調整細胞密度至5×109/L，各取50 μL，加1∶20滅活正常兔血清10 μL，4℃封閉10 min，再分別加入上述mAb，4℃避光30 min，PBS洗2次，流式細胞儀檢測.

1.2.1.5應用標抗大鼠OX62 mAb免疫磁珠分離純化DCs用MiniMACS分離柱篩選，標記細胞在通過置于磁場中的分離柱時，去除膜表面不表達OX62的細胞，將分離柱移出磁場，加壓洗脫，收集OX62＋細胞，具體操作按說明書進行.

1.2.1.6骨肉瘤細胞的培養和融合大鼠骨肉瘤細胞系UMR106培養在含100 mL/L的小牛血清的RPMI 1640培養液中，呈單層生長. 分別收集培養的DCs和骨肉瘤細胞，用細胞融合儀融合，操作按說明書進行.

1.2.1.7融合細胞的篩選待融合細胞在培養瓶中生長24 h后，用MiniMACS分離柱篩選，去除膜表面不表達OX62的細胞，即去除未融合的腫瘤細胞.

1.2.1.8融合細胞的生長特性將融合細胞接種在96孔培養板中，采用MTT比色法測定細胞生長曲線.

1.2.1.9融合細胞的表型檢測同檢測DCs表型方法，流式細胞儀測定融合細胞表面MHCⅠ，MHCⅡ類抗原和OX62的表達水平.

1.2.2骨肉瘤大鼠模型的制備收集培養的UMR106，洗1次，調整細胞濃度，在每只SD大鼠右后肢外側皮下接種1×107個細胞，共60只雄性6～8 wk齡SD大鼠，體質量（125.45±8.19）g.

1.2.3免疫治療大鼠在接種腫瘤細胞3 d后被隨機等分為3組進行治療，即融合細胞治療組（DUF）、腫瘤細胞組（UMR）和生理鹽水對照組（CON）. 用于治療的2×106個融合細胞經30 Gy的60Co射線照射后接種在腹股溝皮下，每周1次，連續5 wk，于第6周處死動物，稱量腫瘤大小及肺轉移情況.

統計學處理：各組腫瘤質量比較采用KruskalWallis H檢驗及Nemenyi法檢驗，各組肺轉移率比較采用χ2檢驗，P＜0.05認為有統計學意義.

2結果

2.1DCs的形態倒置顯微鏡下可見，前3 d大部分細胞呈貼壁生長，體積小、形圓，細胞邊界光滑；4～8 d懸浮細胞數量增多，體積增大，細胞邊界漸趨粗糙；9～12 d大部分細胞呈懸浮生長，細胞數量進一步增多，體積進一步增大，邊界可見明顯的毛刺樣突起（Fig 1）. 掃描電鏡見細胞表面存在大量褶皺和典型的不規則突起(Fig 2).

2.2DCs的表型檢測結果誘導前細胞表面各抗原陽性率分別為OX62，7.48％；MHCⅠ，39.45％；MHCⅡ，28.24％；CD80，2.60％； CD86，6.08％. 經rGMCSF， rIL4和nrhTNFα誘導活化并經免疫磁珠分離純化后，各抗原陽性率較誘導前均有不同程度的升高，分別為OX62，62.19％；MHCⅠ，70.40％；MHCⅡ，78.28％；CD80，55.58％； CD86，68.38％.

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2.3融合細胞的生長曲線測定表明融合細胞較腫瘤細胞生長緩慢（Fig 3）.

2.4融合細胞的表型檢測結果經過篩選的融合細胞各種表面抗原的表達水平均較高，分別為OX62，88.26％；MHCⅠ，84.77％；MHCⅡ，85.87％.

2.5融合瘤苗誘導的原位瘤生長抑制UMR106細胞接種的SD大鼠1 wk內全部可以摸到腫瘤生長（Fig 4），治療5 wk后處死動物測定腫瘤大小并稱其質量（Tab 1）.表1融合瘤苗治療效果的比較

2.6融合瘤苗對肺轉移的抑制對照組肺轉移率高達75％（Fig 5）；融合瘤苗治療組的肺轉移率明顯降低（Tab 1），且肺表面的轉移結節數也明顯減少，融合細胞治療組（DUF）、腫瘤細胞組（UMR）和生理鹽水對照組（CON）的平均肺轉移結節數分別為61， 164和188.

3討論

APC主要包括巨噬細胞、樹突狀細胞和活化的B淋巴細胞，它們表面均表達高水平的MHC抗原和共刺激分子. 本實驗室在1999年成功制備了巨噬細胞融合細胞瘤苗［4］，并在臨床試驗中取得了較滿意的結果. DCs表面的MHC/抗原肽段表達水平比巨噬細胞和B細胞高10～100倍，因此其抗原呈遞能力強于巨噬細胞，DCs可呈遞pmol/L和nmol/L水平的抗原，而其他APC只能呈遞mmol/L水平的抗原，體內體外，僅需少量DCs即可啟動T細胞免疫. 但DCs在血液和組織中含量稀少，只占PBMC的0.1％～0.5％［5］，體外誘導相對困難，極大限制了DCs的研究和應用. 我們采用重組大鼠rGMCSF， rIL4和nrhTNFα聯合誘導大鼠骨髓前體細胞，經體外擴增后從每只大鼠骨髓中可以獲得1×107的DCs，基本可以滿足實驗對DCs數量上的需求.

由于將腫瘤細胞直接作為瘤苗使用效果并不明顯，目前大多數采用基因轉染技術對腫瘤細胞加以修飾，來提高其免疫原性［6］. 但對于mAb未知，或者mAb特異性不夠理想的腫瘤，該方法的推廣必然受到限制. 1994年，Guo等［7］首次以活化的B淋巴細胞與肝癌細胞相融合，使融合細胞表達高水平的MHC分子和共刺激分子，并能誘導出強烈的抗腫瘤免疫應答，該研究啟發人們可以用細胞融合技術來改變腫瘤細胞的抗原特性. 細胞融合技術最大的優點就在于融合細胞能夠呈遞腫瘤細胞所有的抗原，包括已知的和未知的mAb，可以獲得較好的誘導T細胞殺傷作用的效果.

在本研究中，我們采用電融合技術成功地制備了樹突狀細胞融合瘤苗，電融合的效率通常比化學融合法提高1～2個數量級［8］，這在很大程度上彌補了DCs數量較少的缺陷. 融合細胞瘤苗在對大鼠的主動免疫治療中取得了較滿意的結果，融合細胞生長速度變慢；在對荷瘤大鼠做免疫治療時，治療組的腫瘤體積顯著小于對照組（P＜0.01），肺轉移率降低（P＜0.01），轉移結節減少，而腫瘤對照組和生理鹽水對照組則無顯著性差異（P＞0.05）. 該研究結果表明，樹突狀細胞融合細胞瘤苗具有潛在的臨床應用價值，如果能把這種抗原提呈功能最為強大的APC和有代表性的人體骨肉瘤細胞系相融合，制備出新型的融合細胞瘤苗，則該瘤苗的應用有望顯著提高骨肉瘤患者的存活率.

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