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基因多態性分析的意義范文第1篇

【摘要】 目的 探討亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)C677T多態與上海地區漢族人群骨質疏松性骨折遺傳易感性的關系。方法 采用TaqMan方法檢測205例骨質疏松性骨折患者(骨折組)與205例健康人群(對照組)MTHFR C677T的基因型分布及差異。結果 骨折組中的T等位基因頻率為43.7%，顯著高于對照組(36.1%，P=0.027)，提示T是骨折發生的危險因素(OR=1.37，95% CI=1.04～1.82)。與CC基因型相比，CT基因型和TT基因型攜帶者的骨折發生風險分別增加至1.48倍(95% CI=0.95～2.31，P=0.083)和2.11倍(95% CI=1.15～3.89，P=0.017)。將CC、CT和TT視為不同的等級，存在等位基因劑量反應關系(P=0.027)。結論 T增加骨折發生風險，并呈等位基因劑量反應關系，TT基因型是上海地區漢族人群發生骨質疏松性骨折的遺傳易感因素。

【關鍵詞】 骨質疏松性骨折;疾病遺傳易感性;基因，亞甲基四氫葉酸還原酶;基因多態

近年來遺傳因素對骨質疏松性骨折發病的影響逐步受到重視?，F已經發現多種與其發病相關的基因，如維生素D受體、雌激素受體、I型膠原蛋白等〔1～3〕。亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)是另一重要的影響骨質疏松性骨折發病的候選基因，其編碼蛋白與同型半胱氨酸代謝密切相關，而高水平的血清同型半胱氨酸被證實參與骨質疏松性骨折的病理發生〔4，5〕。MTHFR基因在人群中具有多態性，其中以位于催化區的C677T最為常見，導致酶活性、熱穩定性下降和血清同型半胱氨酸水平增加。已有研究顯示，MTHFR C677T是歐洲丹麥人群發生骨質疏松性骨折的遺傳易感因素〔6～8〕。但對我國香港人群的研究結果則顯示，MTHFR C677T與骨質疏松性骨折發病風險無關〔9〕。本研究旨在探討我國上海地區漢族人群中MTHFR C677T多態性與骨質疏松性骨折的關系。

1 材料與方法

1.1 對象 從門診及住院病人中隨機抽取確診為骨質疏松性骨折的上海籍漢族患者205例，男58例，女147例，年齡52～83歲，平均(66.3±7.2)歲。其中椎體骨折89例，髖部骨折116例。骨質疏松診斷標準依據WHO規定(骨密度低于同性別骨峰值的-2.5個標準差)。對照組為門診體檢的上海籍漢族健康人群205例，男57例，女148例，年齡51～83歲，平均(66.6±7.2)歲。入選標準為骨密度大于同性別骨峰值的-1個標準差。兩組性別、年齡方面保持均衡，具有可比性。對全部對象行腰椎(L2～L4)及髖部(髖部骨折患者檢測健側)骨密度檢查，排除影響骨代謝的疾病(代謝性、廢用性及某些藥物、營養不良等所致骨病;骨腫瘤;特發性骨質疏松等)或曾服用影響骨代謝的藥物者。

1.2 方法 按常規蛋白酶K、酚/氯仿法提取外周血白細胞基因組DNA，MTHFR基因C677T多態基因型分析采用TaqMan方法，引物和探針的設計用Primer Express軟件(Applied Biosystems，Foster City，CA)完成。引物和探針的序列如下：上游引物：5′AGGCTGACCTGAAGCACTTGAA3′;下游引物：5′CTCAAAGAAAGCTGCGTGATGA3′;等位基因C特異性TaqMan 探針：5′FAMTGTCTGCGGGAGCCGATTTCAMGB3′;等位基因T特異性TaqMan探針：5′TETAGGTGTCTGCGGGAGTCGATTT

CAMGB3′;擴增片段長度74 bp。PCR擴增體系(25 μl)中含:1× TaqMan PCR master mix (Applied Biosystems，Foster City，CA)，1 μl(50 ng/μl)基因組DNA，1 μmol/L上游、下游引物，0.2 μmol/L FAM標記探針，0.2 μmol/L TET標記探針。擴增參數：50℃ 預熱2 min，95℃ 預變性10 min，然后95℃ 變性15 s，62℃ 復性1 min，共40個循環，最后在ABI 7700上檢測熒光信號?；蛐头治鲇肧equence Detector System 2.0 軟件(Applied Biosystems，Foster City，CA)。

1.3 統計學處理 以非條件Logistic回歸法計算表示相對危險度的比值比(OR)及其95%可信區間(CI)。OR值均經性別、年齡、吸煙和體重指數(BMI，kg/m2)校正。采用SPSS11.0統計分析系統。HardyWeinberg遺傳平衡和趨勢檢驗在Internet上進行(ihg.gsf.de/ihg/snps.html)。

2 結 果

見表1。較大體重指數者(>24.0)在骨折組和對照組中分別占29.3%和50.7%(P

對照組MTHFR C677T基因型頻率：CC 41.0%、CT 45.9%和TT 13.2%，符合HardyWeinberg遺傳平衡定律(P=0.931)，而骨折組的基因型頻率：CC 31.2%、CT 50.2%和TT 18.5%。骨折組中T等位基因頻率為43.7%，對照組為36.1%，T的骨折發生風險是C的1.37倍(95% CI=1.04～1.82，P=0.027)。與CC純合子比較，CT雜合子的骨折風險增加至1.48倍(95% CI=0.95～2.31，P=0.083)，而TT純合子的骨折風險顯著增加至2.11倍(95% CI=1.15～3.89，P=0.017)。將CT和TT基因型合并計算，則其骨折的發病風險顯著增加至1.62倍(95% CI=1.06～2.46，P= 0.025)。若將CC、CT和TT視為不同的等級，存在等位基因劑量反應關系(P=0.027)。表1 兩組對象多種危險因素頻率及其與骨質疏松性骨折的風險〔n(%1)經表中各危險因素校正

3 討 論

MTHFR與同型半胱氨酸代謝密切相關，而高水平的血清同型半胱氨酸被證實參與骨質疏松性骨折的病理發生〔4，5〕。MTHFR C677T多態性改變可導致酶活性和熱穩定性下降，血清同型半胱氨酸水平增加。因此，該多態性可能是人群骨質疏松性骨折的一個危險因素。本研究證實，MTHFR C677T至少是我國上海地區漢族人群骨質疏松性骨折的一個遺傳易感因素。

以往對MTHFR C677T與骨質疏松性骨折發病風險關系的研究主要集中于歐洲丹麥人群，Abrahamsen等〔6～8〕研究顯示，MTHFR T等位基因攜帶(CT、TT基因型)與骨質疏松性骨折發病風險增加有關，這與本研究結果一致。但Li等〔9〕以我國香港人群為對象的研究則顯示，MTHFR C677T與骨質疏松性骨折發病風險無關。其不一致的原因可能香港地區正常人群中CC、CT及TT基因型頻率分別為0.62、0.33和0.05，而上海地區正常漢族人群中三種基因型頻率分別為0.41、0.46和0.13，提示人群差異可能是造成兩項研究結果不一致的重要原因之一。新近以我國安徽省女性人群為對象的研究顯示〔10〕，MTHFR T等位基因女性攜帶者發生骨質疏松性骨折的風險與CC基因型相比呈顯著性增加。本研究進一步表明，T等位基因攜帶不僅顯著增加女性發生骨質疏松性骨折的風險，也同樣增加男性的發病風險。

綜上所述，MTHFR 677TT基因型至少是我國上海地區漢族人群骨質疏松性骨折的一個遺傳易感分子，可作為骨質疏松性骨折高危人群的篩選指標。

參考文獻

1 Moffett SP，Zmuda JM，Cauley JA，et al.Association of the VDR translation start site polymorphism and fracture risk in older women〔J〕.J Bone Miner Res，2007;22(5)：7306.

2 Rivadeneira F， van Meurs JB，Kant J， et al. Estrogen receptor beta (ESR2) polymorphisms in interaction with estrogen receptor alpha (ESR1) and insulinlike growth factor I (IGF1) variants influence the risk of fracture in postmenopausal women〔J〕.J Bone Miner Res，2006;21(9)：144356.

3 Navarro MC， Sosa M， del PinoMontes J， et al. Collagen type 1 (COL1A1) Sp1 binding site polymorphism is associated with osteoporotic fractures but not with bone density in postmenopausal women from the Canary Islands：a preliminary study〔J〕.Aging Clin Exp Res，2007;19(1)：49.

4 van Meurs JB，DhonuksheRutten RA，Pluijm SM，et al.Homocysteine levels and the risk of osteoporotic fracture〔J〕.N Engl J Med，2004;350(20)：203341.

5 McLean RR，Jacques PF，Selhub J，et al.Homocysteine as a predictive factor for hip fracture in older persons〔J〕.N Engl J Med，2004;350(20)：20429.

6 Abrahamsen B，Madsen JS，Tofteng CL，et al.A common methylenetetrahydrofolate reductase (C677T) polymorphism is associated with low bone mineral density and increased fracture incidence after menopause：longitudinal data from the Danish osteoporosis prevention study〔J〕.J Bone Miner Res，2003;18(4)：7239.

7 Villadsen MM，Bunger MH，Carstens M，et al.Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T polymorphism is associated with osteoporotic vertebral fractures，but is a weak predictor of BMD〔J〕.Osteoporos Int，2005;16(4)：4116.

8 Bathum L，von Bornemann Hjelmborg J，Christiansen L，et al.Evidence for an association of methylene tetrahydrofolate reductase polymorphism C677T and an increased risk of fractures：results from a populationbased Danish twin study〔J〕.Osteoporos Int，2004;15(8)：65964.

基因多態性分析的意義范文第2篇

【關鍵詞】 成人遲發自身免疫型糖尿病； MICA基因； 第5外顯子

中圖分類號 R587.1 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2014）16-0036-02

隨著社會與經濟的發展，糖尿病患者數量在迅速增多，對糖尿病的研究也逐漸深入。目前糖尿病主要分為1型糖尿病（T1DM）和2型糖尿?。═2DM），其中成人遲發自身免疫型糖尿?。↙ADA）屬于緩慢進展性1型免疫介導性糖尿病中一個亞型，因其發病時間較晚主要存在于成人中而得名，在糖尿病患者群體中約占有12%[1]。該病慢性進展為T1DM是受到觸發因素的影響還是由于遺傳背景原因一直是臨床爭論的焦點，因此對于MICA基因中第5外顯子多態性與LADA發病的關系也成為了對該病的一個主要研究方向[2]。本文對筆者所在醫院LADA患者、T2DM患者以及正常體檢者的MICA外顯子5多態性進行對比觀察，以分析其與LADA發病之間的相關性，作為臨床參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年5月-2013年8月收治的LADA患者33例（LADA組），其中男17例、女16例，平均年齡（39.82±7.14）歲；另選取同期收治2型糖尿病患者35例（T2DM組），其中男19例、女16例，平均年齡（38.75±8.36）歲；以及正常體檢者40例（NC組），其中男21例、女19例，平均年齡（37.42±11.25）歲。三組年齡、性別等一般資料比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。LADA組入選標準，年齡超過25歲，有明顯“三多一少”等糖尿病臨床癥狀，起病后6個月可不依賴胰島素治療且未出現酮癥，胰島自身抗體呈陽性[3]。

1.2 方法

所有入選研究對象均實施同樣的聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）技術及PAGE銀染技術隊MICA第5外顯子多態性進行觀察，具體步驟如下：首先制備基因組DNA，通過DNA試劑盒對全血基因組DNA進行提取，并使用無水乙醇進行DNA沉淀。而后實施PCR擴增，所應用上游引物序列為5’-CCT TTT TTT CAG GGA AAG TGC-3’，下游引物序列為5’-CCT TAC CAT CTC CAG AAACTG C-3’；反應體系為50μl，其中包括基因組DNA（0.3 μg/μl）含量為5 μl，其上下游引物（10 pmol/L）含量為各5 μl，MgCl2（25 mmol/L）含量為2.5 μl，Taq酶（5 U/μl）含量為0.5 μl，dNTPs（2 mmol/L）含量為1 μl，以及10*buffer緩沖液5 μl和ddH2O 26 μl；設定以下反應條件，在94 ℃環境下進行5 min預變性及45 s變性，而后通過57℃退火及72 ℃延伸各30 s為一個循環，經過30個循環后，進行5 min的72 ℃延伸，而后保存在4 ℃環境下[4]。擴增后使用2%瓊脂糖凝膠進行電泳并使用溴化乙錠進行染色，通過紫外燈照射觀察。

1.3 觀察指標

與NC組相對比，觀察LADA組及T2DM組MICA基因外顯子5的5種等位基因（A4、A5、A5.1、A6、A9）頻率分布情況，并進行統計學對比分析。

1.4 統計學處理

采用SPSS 15.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料采用字2檢驗，P

2 結果

LADA組患者MICA第5外顯子中A5.1等位基因的頻率相比NC組明顯增高，兩組比較差異有統計學意義（P0.05）；T2DM組患者MICA第5外顯子等位基因多態性分布與NC組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。詳見表1。

3 討論

隨著我國社會經濟發展與居民生活水平提高、飲食結構改變等，糖尿病已經成為對我國居民健康、生命造成嚴重影響的重點疾病之一，給患者的家庭與社會均造成了極大的負擔[5]。而隨著對糖尿病研究的進一步深入，不同類型糖尿病之間差異以及診治特點成為有效治療糖尿病患者的重要前提。

LADA屬于1型糖尿病中的緩慢進展型，也具有自身免疫破壞的特點，但該病發病初期與T2DM具有較為相近的臨床表現，在臨床上進行初診時常會因臨床特征而被誤診為T2DM。如按照T2DM治療方法在該病早期應用降糖藥能夠形成控制，但隨病程緩慢進展會逐漸失效，甚至可產生酮癥酸中毒[6]。

該病發病機制與糖尿病患者引起自身免疫破壞機制基本相同，但其中較為特殊的是胰島β細胞的免疫破壞會呈現緩慢進展性，這一機制的誘發是受到外界觸發因素的影響，還是受到遺傳因素的干擾是臨床上爭論的焦點。在1994年發現MIC基因家族中的MICA基因后，對其與LADA發病之間的相關性研究一直收到國內外相關領域的重視。相關研究發現，MICA基因包含外顯子6個、內含子5個，而其中第5外顯子具有GCT重復序列微衛星多態性，包含有A4、A5、A5.1、A6、A9五個等位基因[7]。通過對MICA等位基因與LADA發病過程之間關系的研究，發現其中等位基因A5.1與LADA發病之間存有密切的關聯，從這一角度而言為LADA受到遺傳因素誘發提供了有力的依據[8]。

因各國患者群體MICA基因多態性有所不同，因此本文作者對我國患者的MICA外顯子5多態性與LADA之間進行研究，發現LADA組患者MICA第5外顯子中A5.1等位基因的頻率相比NC組明顯增高，兩組比較差異有統計學意義（P0.05）；T2DM組患者MICA第5外顯子等位基因多態性分布與NC組比較差異無統計學意義（P>0.05）。由此可見，LADA患者的MICA基因外顯子5多態性與正常人有異，其中等位基因A5.1與LADA發病存在較密切相關性，是LADA的重要危險因素。

參考文獻

[1]劉鵬鷹，丁洪光，劉君英，等.MICA外顯子5多態性與成人遲發自身免疫型糖尿病的相關性研究[J].深圳中西醫結合雜志，2010，20（1）：22-24，28.

[2]李玉萍.CTF7L2基因多態性與2型糖尿病及LADA的相關性研究[D].長沙：中南大學，2011.

[3]柳江.成人隱匿性自身免疫糖尿病的臨床篩查線索及其與LYP/PTPN22基因多態性相關性研究[D].蘇州：蘇州大學，2009.

[4]周圓，汪大望.成人隱匿性自身免疫性糖尿病研究進展[J].國際內分泌代謝雜志，2008，28（4）：249-252.

[5]譚愈昱.自身免疫性糖尿病患者NK細胞關鍵受體與配體基因及其表達的探討[D].長沙：中南大學，2010.

[6]丁洪光.LADA與CTLA-4、VDR、MIC-A基因多態性的相關性研究[D].廣州：廣州醫學院，2010.

[7]王競.成人隱匿性自身免疫性糖尿?。↙ADA）臨床特征及其與CTLA-4基因多態性關系的病例對照研究[D].天津：天津醫科大學，2008.

基因多態性分析的意義范文第3篇

【關鍵詞】IL-8；齲；牙周炎

【中圖分類號】R78 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2013）01-0115-01

齲病是一種危害人類健康的常見口腔疾患。細菌及其毒素極易侵襲至牙髓，從而激發牙髓的免疫系統，產生多種細胞因子。IL-8是重要的促炎因子和免疫調節因子，在齲病性牙周炎的發病機制中具有重要作用[1]　。本文檢測正常、不同齲病齦溝液中IL-8，并進行基因多態性分析。了解IL-8在不同牙周狀態下含量的變化及其在齲源性牙周炎發生、發展過程中的意義。

1　資料和方法

1.1　病例選擇：所選我院就診患者。選擇因修復等原因拔除的30　顆無齲損和充填體、無牙髓疼痛史的完整牙齒為對照組。選擇臨床診斷為不同齲齒的患牙各30顆。

1.2　標本的收集和檢測：去除受試牙面的齦上菌斑、牙石，將吸潮紙尖分別插入每顆受試牙的頰、舌面的近中和遠中4個位點。將取完后的四根吸潮紙尖一同放回原EP管中再次稱重，減去原記錄重量，即為所測齦溝液重量。用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測牙髓組織中IL-8含量。所有研究對象都是漢族，用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析檢測病例組和對照組的IL-8基因-251位點的基因型分布，IL-8基因251位點有3種基因型，TT純合子、AT雜合子、AA純合子。

1.3　統計分析：　采用SPSS10.0統計軟件包對結果進行秩和檢驗。

2　結果

2.1 齲病及牙周炎程度與IL-8含量關系

所有齦溝液及牙髓標本均檢出了IL-8，不同個體IL-8含量差異較大。IL-8含量在深齲、重度牙周炎中最高，分別與正常牙齒牙髓組分別對比，差異有統計學意義（P＜0.05）。

齦溝液中IL-8濃度（ng/L）

2.2　齲病牙周炎程度與IL-8基因多態性分析

分析酶切產物，IL-8基因-251位點有3種基因型：TT、AT、AA。如圖所示，如為TT純合子，則l條DN段長度為106bp，AT雜合子3條DN段長度分別為106，75，31bp，AA純合子2條DN段長度為75和31bp。

3　討論

齲病的發生、發展是一個由變鏈菌、粘性放線菌和乳桿菌等參與的感染性慢性進行性牙體硬組織的破壞過程[2]　。細胞因子（CK）　的深入研究使人們對炎癥的認識有了突破性的進展。在對炎癥的認識過程中，已從傳統的炎性介質深入到CK　途徑[3]　，　IL-8是誘導炎癥細胞反應中的最初介質，具有廣泛的生物學效應，可活化各種炎細胞，減低血管張力，增加血管通透性。從試驗結果看，牙髓組織中均存在IL-8，其含量可反應齲病進展過程中的牙髓健康狀態及其免疫防御功能，它是反應齲病牙髓狀態的重要細胞因子。在齲病牙髓炎中TA、AA基因型出現頻率的差別具有統計學意義，說明在遺傳背景下攜帶TA、AA基因型者發生齲病的風險可能增加，IL-8基因-251位點AA及TA基因型可能是漢族人群齲病的易感基因型。研究齲病現狀、病因及病變程度中細胞因子的變化及其與齲病病變程度的關系，為臨床防治及判斷預后有重要的意義。

參考文獻：

[1]　劉軍，劉嵐，曹志中，等.　腫瘤壞死因子對創傷牙髓組織修復的調節作用.　中國臨床康復，2004　，8?。?）?。?60　-　861.

基因多態性分析的意義范文第4篇

【摘要】 目的： 探討klotho基因c?1818t多態性與中國蘇皖地區漢族人群不穩定性心絞痛（unstable angina pectoris, uap）的可能關系。方法： 應用聚合酶鏈反應（pcr）及基因芯片（gene microarray）方法，檢測146例uap患者和235例非冠心病者的klotho基因c?1818t多態性。結果： 與對照組相比：(1)uap患者cc，ct和tt基因型以及t等位基因型頻率分布差異無統計學意義（p值均＞0.05）；(2)年齡<60歲的uap組tt基因型頻率和女性uap組tt基因型，t等位基因頻率均明顯升高（p值分別為0.017，0.049，0.026）。在調整相關危險因素并經多元logistic回歸分析后，tt基因型與女性uap的發生存在相關性（p=0.041），而t等位基因與女性uap的發生無明顯關聯（p=0.472）。結論： 在中國蘇皖地區漢族人群中，klotho基因c?1818t多態性tt基因型與女性uap的發病存在相關性。

【關鍵詞】 klotho；基因多態性；不穩定性心絞痛

［abstract］ objective: to investigate the possible association between the klotho gene c?1818t polymorphism and unstable angina pectoris (uap)in a chinese han population of suwan region. methods： this study was conducted with a case?control design including 146 patients with uap and 235 control subjects who were free from coronary artery disease. the klotho gene polymorphism was determined by polymerase chain reaction and gene microarray. results： compared with the control group, (1)the frequencies of cc，ct，tt genotype and the t allele of the c?1818t in uap group was not significantly different; (2)the prevalence of the tt genetype was obveriously higher in younger (age＜60)patients (p=0.017), the frequencies of tt genetype and t allele were also higher in female (p value was 0.049 and 0.026 respectively). furthermore, after adjustment for conventional risk factors by multiple logistic regression analysis showed that the tt genotype was a significant risk factor for uap in the female carrier (p=0.041), but the t allele had no association with uap in female (p=0.472). conclusion： the tt genetype of klotho gene c?1818t polymorphism was associated with the susceptibility to uap in the female among the chinese han population of suwan region.

［key words］ klotho; genetic polymorphism; unstable angina pectoris

內皮細胞的凋亡及更替在動脈粥樣硬化斑塊形成中起著關鍵的作用［1,2］。kuro?o等［3］發現動脈粥樣硬化是klotho基因缺陷鼠的一種表型，對klotho蛋白的研究［4-9］認為它可通過上調血管緊張素轉換酶（ace）、調節內皮細胞釋放血管內皮生長因子、no等產物及改善血管應激、影響血管緊張度和血栓形成達到抗粥樣硬化作用，從而保護心血管系統。以上研究表明klotho基因與動脈粥樣硬化存在著重要的聯系。雖然目前所知與動脈粥樣硬化形成相關的基因已有400個左右，但對動脈粥樣硬化候選基因進行的一系列大規模基礎研究尚未獲得預期結果［10,11］。本研究旨在探討中國蘇皖地區漢族人群klotho基因c?1818t多態性分布及其與不穩定型心絞痛（unstable angina pectoris，uap）的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象

入選病例均選自2003年11月～2007年2月在江蘇大學附屬武進醫院、江蘇省人民醫院住院患者。選擇uap患者（uap組）146例，男117例，女29例，年齡41～84（平均65.82±9.47）歲，均符合2002年aha/acc關于uap診斷指南的診斷標準。對照組為經相關檢查排除冠心病者235例，其中男138例，女97例，年齡36～84（平均61.58±10.93）歲，大部分經冠狀動脈造影證實冠狀動脈主支無狹窄或狹窄直徑小于50%。所有研究對象均為中國蘇皖地區漢族人。

1.2 方法

1.2.1 聚合酶鏈反應（pcr） 酚?氯仿法提取白細胞基因組dna。由takara公司合成引物，上游引物：5′?gaatgtttacctgtgggatg?3′，下游引物：5′?丙烯酰胺?tgtggttcacctgggact ?3′，預計pcr擴增產物片段長度為209 bp。反應體系：10×緩沖液5 μl，mg2+終濃度為2.0 mmol/l，4種dntp終濃度為0.2 mmol/l，上下游引物各5 pmol，taq dna酶1.25 u（takara），模板dna 100 ng。反應條件：94℃ 5 min，然后94℃ 48 s，58℃ 40 s，72℃ 55 s進行37個循環，72℃延伸5 min。取pcr產物5 μl采用瓊脂糖凝膠-溴化乙啶法進行電泳（圖1），uvi自動凝膠成像分析系統觀察并結合dna分子量標準及測序方法（大連寶生物公司）判斷是否為預期的目的片段。

m: dl?2000 標準參照物 (takara)；1～8: pcr產物電泳條帶

圖1 klotho基因c?1818t多態性pcr產物電泳圖（略）

fig 1 electrophoretic image of pcr protector klotho　gene c?1818t polymorphism

1.2.2 基因芯片制備 冰異丙醇沉淀pcr產物，12 000 r/m離心45 min后37℃烘干備用，同時制備玻片（sigma公司）；取上述純化產物，加18 μl點樣液溶解，0℃保存20 min；將上述混合液置于384微孔板中，放入smartarrayer?48（晶芯，博奧生物公司）點樣儀并在玻片上完成全部點樣；點樣后，玻片在temed中真空干燥1 h，然后按序置于0.1×naoh緩沖液變性10 min，1×tbe緩沖液電泳10 min；取等量5′?cy3? atgcacgttacacatt, 5′?cy5?aaatgcatgttacacatt單核苷酸探針，與雜交液1:3稀釋后，在37 ℃下與點有樣品的玻片雜交3 h后置于冰冷的1×tbe緩沖液中電泳10 min。

1.2.3 基因型判斷 用capitalbiotm掃描儀（晶芯，博奧生物公司）對雜交后的玻片進行掃描，并根據cy5/cy3比值判斷基因型（圖2）。

1.2.4 生化指標測定 采用全自動生化分析儀（奧林巴斯公司）測定三酰甘油（tg）、低密度脂蛋白（ldl）、高密度脂蛋白（hdl）和血糖（glu）等指標。

1.3 統計學分析

計量資料結果以±s表示，采用t檢驗，研究對象組間基因型及等位基因頻率比較采用χ2檢驗，應用多元logistic回歸分析基因型與uap的相關性，關聯程度用優勢比（odds ratio, or）和95%可信區間（confidence interval, ci）表示。所有資料均采用spss 13.0軟件進行分析，p<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 uap組與對照組臨床資料分析

兩研究組收縮壓（sbp），舒張壓（dbp），glu，tg，ldl水平差異無統計學意義；uap組年齡、男性性別比及吸煙比例明顯高于對照組，而hdl水平明顯低于對照組（表1）。

表1 兩組基本資料比較（略）

tab 1 baseline characteristics in two groups

2.2 klotho基因型分析及dna序列測定

第四外顯子c?1818t多態性pcr擴增產物為209 bp的片段（圖1），采用基因芯片方法判斷基因型，本研究檢測到3種基因型：紅色為tt基因型；黃色為ct基因型；綠色為cc基因型（圖2）。并抽取部分pcr產物經測序驗證其基因型（圖3）。

2.3 klotho基因多態性分布

與對照組相比：(1)uap組cc，ct，tt基因型及t等位基因頻率差異無統計學意義（表2，p>0.05）；(2)亞組分析：女性uap患者的tt基因型（p=0.049）及t等位基因（p=0.026）頻率、非老年（＜60歲）uap患者tt基因型頻率（p=0.017）均明顯升高（表3，4）；老年（≥60歲）、男性uap患者cc，ct，tt基因型和t等位基因頻率與非老年uap患者cc，ct基因型和t等位基因頻率及女性cc，ct基因型頻率差異均無統計學意義（表3，4）。

表2 klotho基因c?1818t多態性分布（略）

tab 2 genotype distribution and allele prevalene of klotho gene c?1818t polymorphisms

表3 不同年齡組klotho基因c?1818t多態性分布（略）

tab 3 genotype distribution and allele prevalene of klotho gene c?1818t polymorphisms in different age populations

表4 不同性別研究對象klotho基因c?1818t多態性分布（略）

tab 4 genotype distribution and allele prevalene of klotho polymorphisms in different sexual populations

2.4 klotho基因tt基因型和t等位基因與女性uap患者的關系

在調整吸煙、年齡，sbp，dbp，glu，tg，ldl，hdl等危險因素并經logistic回歸分析后，tt基因型與女性uap存在相關關系（p=0.047，表5），而t等位基因與女性uap無明顯相關關系（p=0.472，表6）。

表5 klotho基因c?1818t多態性tt基因型與女性uap患者的關系（略）

tab 5 unadjusted and adjusted odds ratios for the association between tt genotype of the　c?1818t polymorphism and cases in female

* ：為調整吸煙、年齡，sbp，dbp，glu，tg及ldl等危險因素并經logistic回歸分析的or值，95%ci及p值

表6 klotho基因多態性t等位基因與女性uap患者的關系（略）

tab 6 unadjusted and adjusted odds ratios for the association between t allele of　the c?1818t polymorphism and cases in female

*：為調整吸煙、年齡，sbp，dbp，glu，tg及ldl等危險因素并經logistic回歸分析的or值，95%ci及p值

3 討論

klotho基因位于染色體13q12區域，全長約為50 kb，由5個外顯子和4個內含子組成。該基因編碼兩種蛋白，一種為含有1 014個氨基酸的跨膜蛋白，其膜外段含有兩個重復序列，與細菌、植物的β?葡萄糖苷酶存在20%～40 %的同源性，且含有一段lys?lys?arg?lys的堿性氨基酸序列，該處可被裂解,釋放出小片段肽鏈進入體液循環發揮作用［12］；另一種為含有549個氨基酸的分泌性蛋白。klotho基因缺陷小鼠依賴乙酰膽堿的主動脈舒張功能較野生型明顯下降，其內皮源性no較野生型生成減少［5，13］。在運用腺病毒將klotho基因轉入具有多種動脈粥樣硬化危險因素的大鼠后，可以增加內皮細胞no合成，且具有減輕動脈粥樣硬化的作用［13］。kuwahara等［6］的研究發現klotho基因具有抗動脈粥樣硬化作用，在抗氧化亞氮合酶（nos）抑制劑處理后，粥樣硬化的進程減慢。研究發現［4］klotho基因缺失的老鼠血漿中1型纖溶酶原激活物抑制劑（pai?1）明顯增高。pai?1的表達增加，引起血栓形成的幾率也隨之增加，這預示著klotho基因與血栓的形成存在密切聯系。

klotho基因第四外顯子c?1818t多態性t等位基因頻率在韓國冠心?。╟ad）人群中為0.172［14］，本研究發現，冠心病中的uap患者為0.178（表2），兩組結果相近。由此提示，在兩國冠心病或uap人群中，t等位基因出現的頻率相似。另外，rhee等［14］研究發現，t等位基因（包括ct，tt基因型）攜帶者冠心病患病率（47.1%)較cc基因型攜帶者（60.6%)低(p=0.036），特別是小于60歲的t等位基因（包括ct，tt基因型）攜帶者較cc基因型攜帶者的冠心病患病率低（p=0.025），他們認為c?1818t多態性cc基因型可能是早發冠心病的易感基因型。本研究發現，女性uap患者的tt基因型（p=0.049）及t等位基因（p=0.026）頻率、非老年（＜60歲）uap患者tt基因型頻率（p=0.017）均明顯升高（表3，4）。經logistic回歸分析后顯示tt基因型與女性uap的發生存在相關性（表5）。由于在年齡<60歲的對照組中并沒有發現tt基因型，所以tt基因型是否與年齡<60歲的uap存在相關性，尚不能定論。

綜上所述，本研究結果提示，在中國蘇皖地區漢族人群中，klotho基因c?1818t多態性tt基因型與女性uap的易感性有關，不管是否存在uap發病的其他危險因素，攜帶該基因型的女性有發生uap的潛在性；攜帶t等位基因的女性有發生uap的傾向，但只有同時存在uap發病的其他危險因素時才有發病的可能性。klotho基因廣泛的生物學效應，決定了它不僅在調控衰老的過程中有著重要地位，而且與眾多疾病，特別是冠心病及其特殊類型uap的發病有著密切聯系。我們對klotho基因多態性與uap相關性的研究結果在國內外屬首次報道，為uap患者的基因學研究和一級康復干預補充了實驗室數據，為進一步闡明uap發生的遺傳背景和機制提供了一些線索，進一步補充了冠狀動脈疾病基因klotho單核苷酸多態性的數據庫信息。當然，klotho基因第四外顯子c?1818t多態性與uap的確切關系及具體機制還有待于深入研究。

近年來，有研究推測一些基因變異可以用來預測cad/acs，但所得結果很多不能夠被重復。本研究與國外研究所得出的結論也不盡相同，分析其原因，首先，最大可能與被研究人群的地區和種族差異以及冠心病的類型不同有關。其次，研究對象不完全一致，比如，本研究對象為冠心病中的uap，而不是所有類型冠心病患者；再者，配對設計的方法不同和樣本量偏小等原因也會引起研究結果的不一致。而且klotho基因變異對cad/uap的作用可能與環境因素和其他基因的交互作用有關。所以，雖然有些研究揭示klotho基因所表達的蛋白在調控動脈內皮細胞no和pai?1的生成、血管緊張素ⅱ介導的血管損害以及血栓形成、斑塊破裂等方面起著重要作用，或該蛋白的代謝產物具有拮抗粥樣硬化作用，但klotho基因多態性使動脈粥樣斑塊不穩定的機制尚不清楚。

本研究的局限性：(1)樣本量相對較小，對統計學結果會產生一定影響；(2)對照組部分未行冠脈造影，僅以無胸痛和心電圖正常等為排除uap的標準，其中可能有無癥狀性uap患者；(3)對于c?1818t多態性與冠狀動脈狹窄嚴重程度和冠狀動脈病變范圍（支數）之間的關系未進行研究；(4)行冠脈造影者以冠狀動脈主支無狹窄或狹窄直徑小于50%為入選標準，而冠脈狹窄直徑<50%者將來有可能進展為uap；(5)所入選的研究對象尚存活于世，存活偏倚不可避免，且未對c?1818t多態性與uap、患者生存率進行隨訪。因此klotho基因c?1818t多態性與uap的確切關系以及與uap預后、生存率的關系還有待于下一步的研究。

【參考文獻】

［1］ fukino k, suzuki t, saito y, et al. regulation of angiogenesis by the aging supressor gene klotho［j］. biochem biophys res commun, 2002, 293 (1): 332-337.

［2］ shimada t, takeshita y, murohara t, et al. angiogenesis and vasculogenesis are impaired in the precocious?aging klotho mouse［j］. circulation, 2004, 110 (9): 1148-1155.

［3］ kuro?o m, matsumura y, aizawa h, et al. mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing［j］. nature, 1997,390 (6655): 45-51.

［4］ takeshita k,yamamoto k, ito m,et al. increased expression of plasminogen activator inhibitor?1 with fibrin deposition in a murine model of aging,“klotho”mouse［j］.semin thromb hemost, 2002, 28 (6):545-554.

［5］ saito y, nakamura t, ohyama y, et al. klotho protein protects against endothelial dysfunction［j］. biochem biophys res commun, 1998, 248 (2): 324-329.

［6］ kuwahara n, sasaki s, kobara m, et al. hmg?coa reductase inhibition improves anti?aging klotho protein expression and arteriosclerosis in rats with chronic inhibition of nitric oxide synthesis［j］. int j cardiol, 2008, 123 (2): 91-93.

［7］ nagai t, yamada k, kim hc, et al. cognition impairment in the genetic model of aging klotho gene mutant mice: a role of oxidative stress［j］. faseb j, 2003, 17 (1): 50-52.

［8］ nagai r, saito y， ohyama y, et al. endothelial dysfunction in the klotho mouse and downregulation of klotho gene expression in various animal models of vascular and metabolic diseases［j］. cell mol life sci, 2000, 57 (5): 738-746.

［9］ yang j, matsukawa n, rakugi h, et al. upregulation of camp is a new functional signal pathway of klotho in endothelia cells［j］. biochem biophys res commun, 2003, 301 (2): 424-429.

［10］ puddu p, cravero e, puddu gm, et al. genes and atherosclerosis: at the origin of the predisposition［j］. int j clin pract, 2005, 59 (4): 462-472.

［11］ hiltunen mo, tuomisto tt, niemi m, et al. changes in gene expression in atherosclerotic plaques analyzed using dna array［j］. atherosclerosis, 2002, 165 (1): 23-32.

［12］ shiraki?iida t, aizawa h, matsumura y, et al. structure of the mouse klotho gene and its two transcripts encoding membrane and secreted protein［j］. febs lett, 1998, 424 (1-2): 6-10.

基因多態性分析的意義范文第5篇

[關鍵詞] 蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因；基因多態性；IVS6+G82A；妊娠期高血壓疾病

[中圖分類號] R714 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）06（b）-0041-03

[Abstract] Objective To investigate the polymorphism of protein tyrosine phosphatase 1B gene in patients with hypertensive disorder complicating pregnancy and to investigate its correlation with the disease of pregnancy induced hypertension. Methods 50 cases of patients from June 2013 to December 2015 with preeclampsia， pregnancy induced hypertension， normal pregnant women and normal physical examination personnel were selected as the research object， and the IVS6+G82A gene polymorphism of 1B gene was sequenced. Results Preeclampsia and gestational hypertension GG genotype（40.00%， 26.00%） and the G allele （62.00%， 46.00%） was significantly higher than in normal pregnancy （16.00%， 40.00%） as well as normal medical personnel [to the specific data] （14.00%， 38.00%）， P

[Key words] Protein tyrosine phosphatase 1B gene； Gene polymorphism； IVS6+G82A； Pregnancy induced hypertension

妊娠期高血壓疾病是產科常見妊娠并發癥，其誘發病因復雜繁多[1]。相關研究指出，其發生具有一定遺傳傾向[2]。妊娠期高血壓疾病的發生嚴重影響臨床母嬰妊娠結局。近年有關蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因與糖尿病及血脂異常等的相關研究較為廣泛，對其與高血壓的相關研究也有涉及，但其與妊娠期高血壓疾病的相關性研究甚少。該文為探討蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因多態性與妊娠期高血壓疾病的關系，以便為臨床妊娠期高血壓疾病的預防以及治療提供可靠依據和臨床治療思路，現從該院隨機選取2013年6月―2015年12月期間收治入院的200例人員作為研究對象進行蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因的IVS6+G82A基因位點多態性研究，對照分析妊娠高血壓疾病患者與正常人群之間的差異，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究所選研究對象為該院近年來收治入院的50例子癇前期患者、50例妊娠期高血壓患者、50例正常妊娠孕婦以及50例正常體檢人員。入選患者以及正常人員資料來源于2013年6月―2015年12月。入選均為在該院隨機數字法選取，均具有臨床代表性。50例子癇前期患者年齡在20～41歲之間，平均年齡為（27.36±4.25）歲，孕周在22～40周之間，平均孕周為（37.11±2.63）周。50例妊娠期高血壓患者年齡在23～46歲之間，平均年齡為（28.24±5.02）歲，孕周在25～40周之間，平均孕周為（38.04±3.20）周。50例正常妊娠孕婦年齡在23～44歲之間，平均年齡為（27.97±4.00）歲，孕周在26～40周之間，平均孕周為（37.52±4.58）周。50例正常體檢人員年齡在19～47歲之間，平均年齡為（28.55±7.21）歲。入選人員在年齡、孕周以及體重指數等一般資料上差異無統計學意義（P>0.05），可進行對比分析。

1.2 臨床納入與排除標準

①入選患者均經臨床確診；②入選正常人員均未合并高血壓且不存在高血壓疾病家族史；③排除存在妊娠期糖尿病等其他妊娠期合并癥的患者；④入選人員之間不存在血緣關系；⑤入選患者以及正常人員均簽署知情同意書，均為自愿參與研究[3-5]。

1.3 研究方法

入選200例人員均抽取外周靜脈的EDTA-K2抗凝血300ul備用，采用碘化鉀法提取備用外周血細胞DNA。采用紫外分光光度法測定提取DNA的濃度。用限制性片段多態性PCR（PCR-RFLP）方法對IVS6+G82A多態性位點進行檢測。將PCR產物純化后限制性內切酶Hha I進行酶切，酶切產物用2%的瓊脂糖凝膠電泳30 min。僅顯示301 bp為IVS6G+82A突變純合型，顯示187 bp和114 bp為IVS6G+82A野生型，顯示301 bp、187 bp以及114 bp為IVS6G+82A突變雜合型。測序后選取三型樣本進行正反向DNA測序進行結果驗證。

1.4 觀察指標

蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因IVS6+G82A基因位點多態性分布。

1.5 統計方法

采用SPSS 18.0統計學軟件統計分析資料；其中計量資料用（x±s）表示，并用t檢驗；計數資料用χ2檢驗；P

2 結果

蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因IVS6+G82A基因位點多態性分布入選人員IVS6+G82A基因位點基因型以及等位基因頻率見表1。

3 討論

妊娠期高血壓疾病是一種嚴重威脅母嬰生命健康的妊娠期并發癥，患者可出現多系統功能的紊亂現象，導致多種不良妊娠結局的發生。據相關報道顯示[6]，妊娠期高血壓疾病在我國患病率高達9.4%，子癇前期患者占到0.9%，極大程度上降低了孕產婦的生育質量。妊娠期高血壓疾病的發生受到孕產婦年齡、營養狀況、體重指數以及精神狀態等多方面因素的復雜影響。近年來有關資料顯示[7]，各型妊娠期高血壓疾病的發生與基因位點突變具有一定相關性。其中鹽皮質激素受體基因、血管緊張素原基因、降鈣素基因以及內皮素1基因的突變均可誘發妊娠期高血壓疾病的發生。相關研究指出[8]，在肥胖相關性高血壓患者中，超質量高血壓組患者蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因IVS6+G82A基因位點GG基因型的頻率（33.89%）顯著高于單純高血壓（9.27%）、超質量正常對照組（12.93%）以及正常對照組（18.00%），其等位基因（272）顯著高于其他3組（132、101、140）。

該文為探討妊娠期高血壓疾病患者的蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因多態性與疾病發生的相關性，現從該院隨機數字法分別選取子癇前期患者、妊娠期高血壓患者、正常妊娠孕婦及正常體檢人員各50例進行研究，子癇前期患者以及妊娠期高血壓患者的IVS6+G82A基因位點GG基因型（40.00%、26.00%）和G等位基因頻率（62.00%、46.00%）均顯著升高。與臨床相關高血壓與蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因IVS6+G82A基因位點突變的研究存在較高的一致性。

綜上所述，G等位基因頻率的升高可在一定程度上增加妊娠期高血壓疾病患病的危險性，是疾病發生的獨立危險因素，妊娠早期加強對其篩查及早預防，可有效提升妊娠質量。

[參考文獻]

[1] 溫如玉，傅芬.妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中ApoE、LPL ser447stop基因多態性檢測及意義[J].山東醫藥，2012，52（18）：23-26.

[2] 張文華，位菊峰，于華等.妊娠中期脂肪型脂肪酸結合蛋白及胰島素抵抗與子癇前期相關性研究[J].中華臨床醫師雜志：電子版，2013，7（16）：142-143.

[3] 吳晶晶，顏建英.子癇前期患者血清內脂素水平與血脂代謝及胰島素抵抗的相關性[J].國際婦產科學雜志，2013，40（6）：510-513.

[4] 王芳，平智廣，秦玲，等.AT1R基因多態性與妊娠期高血壓疾病相關性的Meta分析[J].中國婦幼健康研究，2012，23（3）：285-288.

[5] 盧斌，許一新，馬健，等.新診斷2型糖尿病患者外周血單個核細胞蛋白酪氨酸磷酸酶1B的表達[J].中華實用診斷與治療雜志，2013，27（11）：1054-1055，1058.

[6] 馬慶波，劉一鳴，陳余滿.血管緊張素Ⅰ轉化酶基因多態性與妊娠期高血壓關系的Meta分析[J].西部醫學，2012，24（5）：851-853，855.

[7] 馬雅英，黃斌倫，王敏.ZPI基因外顯子-3多態性與妊娠高血壓疾病子癇前期凝血功能的相關性分析[J].浙江醫學教育，2013，12（6）：42-45.